在生物领域采用的离心机系统,除了应具备离心机的一般要求外,还应满足生物生产的技术要求,这包括灭菌、冷却、密封,以保证产品不受污染并不污染环境 。现代哦离心机装置包括以下三个步骤,并进行程序控制:离心、离心系统的灭菌及就地清洗 。如阿法-拉伐公司离心机产品的装置,具有双重轴向密封,密封由装在转筒主轴上下的碳化硅动环和固定环组成,密封由水连续冷却和润滑,可防止产品被污染,也可防止生产过程中排出的废物对环境的污染 。该离心机又如一个密闭的压力容器,可在121℃温度下进行蒸汽灭菌,该离心设备设有环绕离心机转筒的冷却夹套,对悬浮液和浓缩的固体都能进行充分的冷却,并能有效地控制温度,这对于生物制品是非常重要的 。如btpx205型离心机可用于细胞收集、培养液的净化和细胞碎片的分离,可用于疫苗、酶制剂等的提取 。该机的其他辅助系统及控制系统也较为完善,如设有压力指示器、力量计、温度传感器和液面传感器 。
3.膜分离技术
在蛋白质纯化过程中主要用到的膜分离技术多为超滤 。在静压作用下降溶液通过孔径非常小的滤膜,使溶液中分子量较小的溶质透过薄膜,而大分子被截留于膜表面 。大多数超滤膜是由一层非常薄的功能膜与较厚的支撑膜结合在一起而组成的 。功能膜决定了膜的孔径,而支撑膜提供机械强度以抵抗静压力 。超滤浓缩的优点是:操作条件温和,无相变化,对生物活性物质没有破坏 。
超滤系统主要由料液贮罐、泵、超滤器、透过液收集罐组成,料液经泵打入超滤器,水及低分子量物质排出超滤器外,被浓缩的料液在料液贮罐、泵、及超滤器中循环 。当料液浓缩至一定的倍数后即可作为进一步处理的浓缩料液 。
超滤应用于蛋白质类物质的浓缩和脱盐过程中时应注意以下问题:第一,在超滤循环过程中,由于泵和叶轮与料液的摩擦放热作用,料液的温度会逐渐升高,会造成蛋白质分子的损失 。因此,料液贮罐应加冷却系统,并安装自动测温及控制系统 。第二,某些酶的辅助因子散失为问题:一些酶含有辅助因子,其分子量小,超滤时易从透过液中排除掉,因而在超滤前或超滤后要添加一定浓度的的辅助因子 。
还可将超滤与亲和层析相结合以提高分离纯度 。其工作原理是:当溶液中欲被分离的蛋白质不受阻碍地通过超滤膜的孔隙时,如果在膜的一侧结合着亲和配基,该蛋白质就会与配基结合因而结聚在膜的这一侧 。不与配基结合的其他物质就将穿过孔而被带走 。再用适宜的洗脱剂将该蛋白质洗脱下来,洗脱液用于进一步的分离纯化 。
4.泡沫分离
原理:将气体通入含多种组分的溶液中,由于这些组分的表面活性由差异,因此在溶液的表面,某些组分将形成泡沫,泡沫的稳定性取决于操作条件及溶液的生物学特性 。泡沫中含有更多的表面活性成分,故泡沫的组分种类及其含量与溶液中的不相同 。这样,溶液中的组分舅得以分离 。
蛋白质较易吸附与气液界面,这有利于其结构的稳定 。泡沫分离过程是:蛋白质从主体溶液中扩散到气液界面,该过程可能是可逆的也可能是不可逆的;分子发生重排,一般认为在空气-水界面会形成两种类型的膜,一种是稀膜,另一种是浓膜,可能会发生由多个分子聚集在一起的现象 。在气液界面形成的蛋白质膜可以是单层的也可以是多层的 。膜的类型取决于主体溶液及气液界面上蛋白质的特性、结构和浓度 。
泡沫分离的目的,一方面提高酶蛋白的富集率(泡沫中蛋白质的浓度/最初溶液中蛋白质浓度),另一方面提高酶蛋白的提取率(泡沫中蛋白质的提取率/最初的蛋白质质量),或使多组分混合物中某一组分的分配系数最大 。
二、抽提
沉淀
1.盐析
常用的盐析剂是硫酸铵,其溶解度大、价格便宜 。硫酸铵沉淀蛋白质的能力很强,其饱和溶液能使大多数的蛋白质沉淀下来 。对酶没有破坏作用 。
ph的控制:应从酶的溶解度与稳定性两个方面考虑,在酶等电点时其溶解度最小易沉淀,但有些酶再等电点时稳定性较差,因此要选择最佳ph值.一般要求在酶最稳定的ph值的前提下再考虑最适宜酶
味精吃多对人有什么危害?常听说味精是工业制成的,食用对人体有害,这是真的吗?
这么说其实冤枉味精了 。味精其实是十分天然的一种调味料,它的主要成分也就是提供鲜味的成分便是一种天然的氨基酸——谷氨酸钠,这种物质广泛、天然地存在于豆类、粮食、海藻、鱼等食物当中 。
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