朗伯比尔定律的公式及符号含义朗伯比尔定律( 三 ) _知识分享

3)如果样品中的其他成分被吸收，但不与显色剂反应，则当显色剂未被吸收时，样品溶液可作为对照溶液。当显色剂被轻微吸收后，在加入显色剂前，可在供试品溶液中加入适当的掩蔽剂掩蔽待测组分，此溶液可作为对照溶液。
3.2.3选择吸光度读数范围的实践证明，当吸光度在0.2-0.5范围内时，测量的相对误差最小。调节被测溶液吸光度的方法有两种:1)控制被测溶液的浓度。例如改变取样量、改变溶液的浓度或稀释度。2)选择不同的比色皿。吸光度小的溶液应使用光程长的比色皿，吸光度大的溶液应使用光程短的比色皿。四。应用
4.1应用领域
4.1.1高含量组分的测定-差示法当待测组分含量较高时，测得的吸光度值往往偏离朗伯-比尔定律。即使没有偏差，通常也是用纯溶剂作为参比溶液(常见的光度法)，这样测得的吸光度过高，超过了合适的读数范围，导致误差较大。这个缺点可以用微分法来克服。但应用差示法时，要求仪器光源有足够的发射强度或能增加光电流放大倍数，这样才能将参比溶液的透过率调整到100% 。这就要求单色仪质量高，光电系统稳定性好。
4.1.2多组分分析使用紫外-可见分光光度法，通常可以在不分离的情况下测定同一样品溶液中的多种组分。假设溶液中同时存在两个组分X和Y，它们的吸收光谱一般有重叠和不重叠的情况。不重叠的确定成分不会相互干扰。如果吸收光谱重叠，则分别在λ1和λ2处测量吸光度A1和A2 。从吸光度值的相加获得联立方程，并且通过解联立方程获得浓度值。
4.2定量方法紫外-可见分光光度法分析的定量基础是光吸收定律，但具体操作方法有很多。
4.2.1标准曲线法，即工作曲线法，适用于大量重复样品分析，是工厂控制分析中应用最广泛的方法。根据光吸收定律，ε是有色化合物的常数值。如果光程L也是固定的，那么吸光度A与溶液的浓度C成正比，也就是说吸光度A与浓度C成线性关系，配制一系列适当浓度的标准溶液，显色后测定其吸光度，将吸光度A对浓度C作图，得到工作曲线。
直接比较法
直接比较法的本质也是工作曲线法，是一种简化的工作曲线法。将一个标准样品与已知浓度的被测组分cs匹配，测得其吸光度为，然后在相同条件下测得未知样品的吸光度为Ax，计算出未知样品的浓度cx 。
As=εcsL
Ax=εcxL
因为溶液性质相同，比色皿厚度相同，所以/Ax=cs/cx公式:
cs——已知被测组分的浓度，mol/L；
Cx-未知样品的浓度，mol/L；
被测成分的已知吸光度；
Ax-未知样品的吸光度。直接比较法简化了绘制工作曲线的步骤，适用于单个样品的测定。操作时，应注意配制的标准样品的浓度要接近被测样品的浓度，这样可以减少测量误差。
4.2.3标准加入法标准加入法是工作曲线的特殊应用。选择合适的显色条件，先以浓度cx为Ax测定未知样品的吸光度，然后在未知样品中加入一定量的标准样品，配制成浓度cx+δ C1，CX+δ C2 ……的系列样品，显色后，测定吸光度为A1，A2……最后在坐标纸上，以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，分别画出δ C1和δ C2对应的A1和δ C2 。应用标准加入法时，应注意加入的标准样品浓度要合适，以使绘制的曲线保持在合适的角度。浓度过大或过小都会造成测量误差。该方法操作麻烦，不适用于系列样品分析，但适用于成分复杂、干扰因素多的样品，因为它可以消除背景的影响。
4.3紫外-可见分光光度计的使用注意事项4.3.1保护光源。光源灯有一定的寿命。仪器不工作时不要开灯。如果间歇时间很短，不要关灯。机器停止后，待灯冷却后重新启动，预热15分钟。当灯泡发黑或亮度明显减弱或不稳定时，要及时更换。紫外线照射后形成结痕可以用无水乙醇去除。
4.3.2保证合适的工作环境温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。不适当的温度和湿度会引起机械部件的腐蚀，降低金属镜面的光洁度，引起仪器机械部件的误差或性能下降；造成光栅、反射镜、聚焦镜等光学元件铝膜腐蚀，造成光能不足、杂散光、噪声等。甚至使仪器停止工作，从而影响仪器的寿命。维护期间，应定期校正温度和湿度。实验室，尤其是位于中国南方的实验室，应具有四季恒温的仪器室，配备恒温设备。环境中的灰尘和腐蚀性气体也会影响机械系统的灵活性，降低各种限位开关、按键和光电耦合器的可靠性，也是光学元件铝膜腐蚀的原因之一。所以一定要定期清洗，保证仪器内的环境和卫生条件，防止灰尘。

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