如何利用组学工具快速切入临床科学问题形成科研思路？( 四 )

2.细胞水平上：特异性敲除了U87-MG和U251-MG细胞中的EGFL7 。免疫荧光结果显示沉默EGFL7的细胞系中EGFL7蛋白信号较弱。 CCK-8检测显示U87-EGFL7kd和U251-EGFL7kd显著抑制细胞增殖
3.动物水平上：裸鼠分别注射U87-MG细胞、U87-EGFL7kd细胞、U87-MG细胞+司美替尼治疗。 EGFL7敲除组与司美替尼治疗组的颅内信号强度在肿瘤细胞注射后第14天显示出肿瘤体积的差异。小鼠生存分析和免疫组化染色表明，司美替尼有效抑制U87胶质瘤的生长小鼠颅内肿瘤标本中ERK和PKM2表达均与EGFL7表达呈正相关。

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案例二
KIF5A-dependent axonal transport deficiency disrupts autophagic flux in trimethyltin chloride-induced neurotoxicity.（客户案例）

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影响因子：IF=9.77
科学问题：三甲基氯化锡（TMT）在工业和农业领域中广泛用作杀菌剂和塑料稳定剂的组成成分，普遍被认为具有有效的神经毒性，尤其是在海马神经元细胞中。然而， TMT诱导神经毒性的机制仍然不清楚。
研究内容
1. 表型实验：通过CCK-8分析确定TMT在Neuro-2a细胞中的神经毒性。用2μM、4μM和8μM TMT处理细胞24小时分别导致细胞活力降低约15％， 31％和44％。
2. 蛋白质组分析：确定了8μM TMT处理组和对照组的蛋白质表达谱。与对照组相比， TMT组中共有340种差异蛋白，其中204种蛋白上调， 136种蛋白下调,进一步研究表明TMT破坏了自噬体的清除，导致它们在细胞质中的积累。 IPA显示出对KIF5A信号通路的抑制与自噬相关蛋白显著相关，并且KIF5A通过与GABARAP、GABARAPL1和GABARAPL2的相互作用而成为自噬通量的重要调节剂，因此假设KIF5A可能是参与自噬通量调节的关键因素。
3.细胞水平上：KIF5A过表达明显恢复了8μM TMT处理的Neuro-2a细胞的细胞活力。 PRM靶向蛋白分析技术显示Kif5a过表达可恢复tmt处理的neuro2a细胞中自噬相关蛋白的水平。 KIF5A过表达可有效挽救TMT诱导的轴突运输缺陷。
4. 动物水平上：腺相关病毒(AAV)-KIF5A ，并通过尾静脉注射给小鼠。过表达KIF5A的小鼠明显减轻了癫痫发作症状和海马损伤。同时， KIF5A过表达也减少了LC3B-II的积累并增加了海马中的CTSB活性。

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