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归一化后的ADPR强度计算NAD酶活性。
（d）由Sarm1组成性激活引起的轴突变性。将表达每个Sarm1突变蛋白的DIO版本的慢病毒与表达Cre的病毒载体相结合，将培养的Sarm1-/-感觉神经元转化。轴索完整性通过相差显微镜（上部分）或抗Tuj1（绿色）/抗NF-M（红色）共免疫染色（下部分）进行检查。
（e）轴突变性定量。
▲图3 Sarm1ARM内NAD+结合位点。
(a) NAD+结合的Sarm1ARM在Sarm1(E642A)结构中的条带表达。 NAD+显示为由元素着色的品红色棒。将Sarm1ARM参与NAD+结合的区域标记为绿色。
(b) 结合NAD+分子的低温电镜密度。该地图的等高线高度为6.0 。
(c) Sarm1ARM与NAD+相互作用示意图总结。表示形式:垂直线，芳香相互作用;虚线、氢键或盐桥(<4.0埃) 。通过侧链与NAD+发生芳香性或亲水性作用的残基为黑色，通过主链的残基为蓝色。灰色残基与NAD+具有范德华相互作用(<4.0埃) 。
(d) Sarm1ARM内NAD+结合位点立体视图。所有参与NAD+结合的残基都显示在侧链上。氢键和盐桥用虚线表示。
▲图4 NAD+与Sarm1ARM的结合促进了Sarm1的自我抑制。
(a) 微尺度热泳(MST)检测NAD+对Sarm1ARM+SAM的亲和力。
(b) Sarm1ARM内NAD+结合位点的静电性能，在pH 7.0和一价阳离子和阴离子浓度0.15 M时计算。第一组侧链[R(左):R110;R(右):R157;第二组(W: W103;问:Q150;H: H190)残基以条状表示，分别以绿色和黄色表示。
(c) 对NAD+结合位点突变的Sarm1 NAD酶活性进行TLC分析。 RRK to A: R110A、R157A、K193A;RRK to E: R110E、R157E、K193E;WQH到A: W103A Q150A ，和H190A 。
(d) 采用高效液相色谱法(HPLC)测定Sarm1的NAD酶动力学。
(e) 组成活跃的Sarm1诱导轴突变性。将表达每个Sarm1突变蛋白的DIO版本的慢病毒与表达Cre的病毒载体相结合，转染Sarm1-/-感觉神经元。轴突完整性通过相衬显微镜(上片)或抗Tuj1(绿色)/抗NF-M(红色)共免疫染色(下片)检查。
(f) 对轴突变性进行量化。
作者简介
张哲
个人介绍:
2008年6月毕业于山东大学生命科学学院生物技术（生命科学基地）专业。 2008年9月至2015年1月在中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所攻读博士学位，师从丁建平教授，主要利用X-射线晶体学研究与内吞过程相关的小G蛋白Rab GTPases在膜泡运输过程中发挥功能的分子机制。 2015年2月至2019年6月前往美国洛克菲勒大学陈珏（Jue Chen）教授课题组从事博士后研究，利用单颗粒冷冻电镜（single-particle Cryo-EM）技术对CFTR（Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator）蛋白发挥阴离子通道（anion channel）功能的分子机制进行了系统的阐释；并首次揭示了两种治疗囊性纤维化疾病（Cystic Fibrosis）的药物在该蛋白上的结合位点。 2019年7月正式加入北京大学生命科学学院和北大-清华生命科学联合中心，担任研究员，开始组建膜生物学与生物物理学实验室。
教育经历:
2008年9月-2015年1月，博士，中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所
2004年9月-2008年6月，本科，山东大学生命科学学院
杨竞
个人介绍:
2003年师从赵进东院士于北京大学生命科学学院获得生物科学学士学位， 2004年至2009年师从诺贝尔奖得主Michael Brown教授和Joseph Goldstein教授于美国得克萨斯大学西南医学中心获得生物医学博士学位， 2009年至2015年师从Marc Tessier-Lavigne教授在美国基因泰克公司和洛克菲勒大学从事博士后研究。 2015年入职北京大学生命科学学院，曾获得优秀青年科学基金等资助，并曾荣获Tri-Institutional Breakout Prize、“求是”杰出青年学者奖等多项重要学术奖项。