1、蛋白质浓度测定微量凯氏定氮法一 目的：学习蛋白质微量凯氏定氮法的原理及操作技术 。
二 原理：天然有机物(蛋白质等)的含氮总量 ， 通常用微量凯氏定氮法来测定 。
该法是利用一般蛋白质含氮量平均在16 ， 将测得的含氮量折算成样品中的蛋白质含量 。
样品在凯氏烧瓶中经硫酸消化后 ， 蛋白质分解产生氨 ， 氨与硫酸作用生成硫酸铵 ， 分解反应进行很慢 ， 需加入催化剂(HgO) ， 加K2S04以提高溶液的沸点 ， 加入H202可加速反应 。
消化完后 ， 在凯氏定氮仪中 ， 加入强碱碱化消化液使硫酸铵分解 ， 放出氨 。
用水蒸汽蒸馏法将氨收集于过量的硼酸溶液中 ， 以标准酸滴定 ， 根据标准酸消耗的量 ， 乘以一定系数 ， 即可计算样品中蛋白质的氮含量 。
若以甘氨酸为例 ，。

2、其反应式如下：三 器材50ml凯氏烧瓶 ， 50ml锥形瓶 ， 12ml移液管 ， 10ml量筒 ， 表面皿 ， 10ml酸式滴定管 ， 滴定台 ， 漏斗架 ， 万用电炉 ， 微量凯氏定氮仪 ， 电热套 。
四 试剂及样品(1) 40% NaOH - 5% Na2S2O3溶液;
(2) 混合指示剂：0.04%甲基红-60% 乙醇指示剂溶液;
(3) 2%硼酸溶液;
(4) 0.01N盐酸标准溶液；(5) 酱油（20ul）、维他奶(100ul)样品 。
(6) 标准硫酸铵溶液（0.3mg/mL 氮）五 操作方法(1) 消化：取酱油（20ul）、维他奶(100ul) ， 分别放入50ml凯氏烧瓶中 ， 加入粉状硫酸钾约2.25g ， 黄色HgO 20mg ， 硫酸 。

3、1.5ml ， 摇动烧瓶 ， 使全部样品浸没于硫酸内 ， 将烧瓶置于电炉上 ， 在通风橱内加热至量样品中有机物全部破坏 ， 停止加热 ， 放冷 ， 加2滴H202 ， 继续消化10min（颜色由黑变透明） 。
同时消化1份空白烧瓶 。
(2) 溶解消化液：冷后(约10分钟) ， 向每个盛有消化液的凯氏烧瓶加蒸馏水10ml ， 加热溶解 ， 备用 。
(3) 蒸馏和滴定安装好凯氏定氮装置 ， 在水蒸汽发生器内装入蒸馏水至 23体积处 ， 加入硫酸lmL ， 甲基红指示剂23滴 ， 少许沸石 ， 毛细管数支 ， 接通电热套的电源 ， 加热 ， 用产生的水蒸气冲洗全套仪器 ， 至馏出液不显酸碱性 。
从进样杯中分别加入lml标准(NH4)2SO4溶液、样品液、空白液 ， 用少量蒸馏水洗3次凯氏烧瓶 。

4、 ， 塞好小玻塞 。
量取2硼酸-混合指示剂溶液10mL于锥形瓶(接收瓶)中 ， 置于冷凝管下端 ， 不要留下空隙 。
注入10ml 40Na0H5% Na2S2O3碱液到进样杯中 ， 小心提起玻塞 ， 慢慢放入碱液 ， 当碱液流剩少许时 ， 塞下小玻塞(防止NH3 逸出) ， 此时碱液与消化液呈黑色 。
10ml水分3次注入进样杯 ， 操作同上 ， 目的是尽量把碱液冲下去 。
立即塞紧棒状玻塞 ， 并加入少量蒸馏水 ， 水封进样杯口 ， 以防漏气 。
关闭排液管 ， 开始蒸馏 ， 让其反应至指示剂在5分钟内变色 ， 自变色起蒸馏5分钟 ， 溶液从粉色绿色 ， 到时间后 ， 冷凝管下端移离指示剂液面 ， 继续蒸馏1分钟 ， 用蒸馏水冲洗冷凝管下端出口 ， 锥瓶口以表面皿复盖待滴定 。
用标准盐酸滴定至终 。

【分析化学|分析化学实验报告4蛋白质微量凯氏定氮法】5、点（淡粉色) 。
本实验成功的关键：A清洗干净反应室；B加样时放松排液夹；C加碱时保持密闭状态；D用硼酸指示剂接收氨 ， 下口全泡入液中；E蒸馏时夹紧排液夹 。
F. 滴定准确 。
注意事项：(1)在整个测定过程中 ， 应该避免周围环境里氨的影响 ， 以确保结果的稳定 。
(2)若消化液未冷却便加水 ， 可使硫酸爆沸或消化瓶爆裂 ， 很危险!若水不纯 ， 含OH- ， 可使无色透明之消化液变色 ， 黄褐或黑色 。
六. 计算1）标准硫酸铵氮含量的计算：标A为滴定样品用去的盐酸平均ml数；NHCL 为盐酸的质量浓度等于0.0100mol/L;
14为氮的原子量(1ml 0.OlmolL盐酸相当于0.14mg氮)；2）样品氮及蛋白质的质量浓度的计算：样品氮的质量浓度的计算：式样品中：A为滴定样品用去的盐酸平均ml数；B为滴定空白用去的盐酸平均m1数；0.0100为盐酸的浓度(molL);
n为样品的稀释倍数 。
14为氮的原子量(1ml0.OlmolL盐酸相当于0.14mg氮)；V为样品ml数 。
蛋白质的质量浓度的计算:样品中蛋白质含量（mg/ml）=蛋白氮NN为不同样品的蛋白质换算系数 ， 一般均按蛋白质含氮量16计算 ， 即10016=625 ， 需要比较准确的计算时 ， 应采用不同的换算系数 。
如七思考题：1.测定标准硫酸铵和空白的目的分别是什麽？2.小结本人实验中的经验教训 。

来源：(未知)

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标题：分析化学|分析化学实验报告4蛋白质微量凯氏定氮法