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用Trizol 法提取RNA什么是Trizol？Trizol 是一种总RN 。

2、A抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质 ， 能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出核酸酶 。
由于RNA酶无处不在和其难以灭活的顽固本性,RNA的抽提环境应严格控制,所用试剂耗材均应是RNase-free或经过DEPC处理过的,具体的注意事项可参见上一篇文章分子狗,你还在谈qRTPCR色变吗？ 。
接下来我们着重从实验步骤的各个阶段进行剖析:一,样品准备从组织中提取总RNA液氮研磨 ， 将组织块放入研钵中 ， 加入少量液氮 ， 迅速使用研杵研磨,期间不断加入液氮 ， 直到组织研磨成粉末状 。
每50-100 mg组织加入1 mlTrizol ， 转入1.5 ml EP管中进行后续操作.匀浆,组织体积不要超过Trizol体积的10% ， 用匀浆器充 。

3、分匀浆 ， 直到无明显颗粒 ， 转入1 。
5 ml EP管中进行后续操作.从细胞中提取总RNA贴壁细胞,去除培养基 ， 用适量无菌PBS清洗细胞表面 ， 加入1 ml Trizol,用带滤芯的RNasefree枪头反复吹打细胞 ， 将收集的样品置于RNase-free的离心管中 ， 冻存在80冰箱备用.悬浮细胞 ， 收集细胞悬液 ， 1000g离心5 min ， 弃培养基；用适量无菌PBS清洗细胞,1000g离心5 min弃上清 ， 沉淀加入1 ml Trizol,用带滤芯的RNasefree枪头反复吹打细胞 ， 将收集的样品置于RNasefree的离心管中 ， 冻存在80冰箱备用 。
从细菌中提取总RNA对于细菌或蛋白质、脂肪、多糖或细胞外基质 。

4、含量高的样品 ， 需要额外的分离步骤.加入Trizol吹打混匀后 ， 4 ， 12000g,离心10 min 。
将上清转移至新的RNasefree的离心管中,存在80冰箱备用 。
二 ， RNA提取将冻存的RNA样本从-80冰箱取出置于冰上解冻 。
于每管样本中加入200 lRNA专用的三氯甲烷（每毫升Trizol加200 l) ， 置于振荡器震荡1 min ， 冰上静置5 min.4 ， 12000g ， 离心10 min 。
此时液体分三层,将上层的水相转移到另一个RNasefree的离心管中.加入等体积的20预冷的RNA专用的异丙醇 ， 上下颠倒混匀,于-20静置15 min以上 。
注：增加20的静置时间会增加RNA尤其是miRNA的得率 。

【最新|(最新整理)用Trizol法提取RNA】5、 。
4 ， 12000g ， 离心15 min ， 小心弃上清 。
加入1 ml预冷的75%的乙醇(25% DEPC无菌水 ， 75 RNA专用无水乙醇）涡旋混匀 。
4 ， 7500g,离心10 min,尽量去除离心管中的残液,然后在无菌操作台中风干约10 min(注意不要过度干燥 ， 否则难以溶解） 。
每个离心管中加入适量的RNase-free的ddH2O溶解沉淀 ， 用枪头吸打混匀 ， 至完全溶解 。
离心几秒 ， 让离心管中的液体全部在管底,然后置于冰上 。
去除杂质DNA：a在RNasefree的离心管中配制以下去除RNA中DNA的体系反应液：ReagentVolumeTotal RNA10 g10DNaseI buffer(Mg2+)5 。

6、 lDNaseI （1U/l）10 lRNase Inhibitor（40U/l）0 。
5 lDEPCtreated water up to50 lb加入25 l 50 M的EDTA ， 65反应10 min 。
c 用RNase-free的ddH2O定容到100 l 。
d加入10 l 3M NaAc和250 l冷乙醇 ， 混匀后-80放置30 min以上 。
e4 ， 12000 rpm离心10 min ， 弃上清.f加入75的冷乙醇 ， 4 12000 rpm离心10 min ， 尽量弃上清 。
g打开EP管盖子 ， 在操作台中风干约10 min 。
h 用适量的RNasefree的ddH2O溶解后,使用Nanodrop2000测RNA 。

7、的浓度 。
琼脂糖电泳检测RNA的完整性：建议使用DEPC处理的ddH2O配置1 。
2琼脂糖凝胶 ， DEPC处理的ddH2O稀释TAE缓冲液 。
*完整的RNA经凝胶电泳后会明显地观察到28S和18S两条带 ， 并且28S的条带亮度约是18S的两倍 。
若两条条带不明显 ， 则提示RNA可能部分降解 。
提取的RNA可用于后续操作 ， 如需用qRTPCR检测基因表达 ， 为避免RNA降解,建议提完RNA后立即将RNA逆转录成cDNA进行保存 ， cDNA可在-20长期保存 。
常见问题及解决办法RNA的各种吸光度代表什么?260 nm、230 nm、280 nm下的吸光度分别代表了核酸、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值 。

来源：(未知)

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