21. 苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中 ， 对环境有严重危害 。
小明同学准备依据下图操作步骤 ， 从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株 。
请回答下列问题:（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水 ， 其中可作为碳源的有_____________ 。
（2）将采集到的样品接种培养 ， 苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____________ 。
以达到富集酚降解菌的目的 。
若上图平板中菌落过于密集 ， 应进一步_____________ ， 以便于菌落 。

14、计数与分离 。
制备平板培养基时除了需要水、营养物质外 ， 还必须添加_____________ 。
（3）下图为连续划线法示意图 ， 在图中_____________ （填图中序号）区域更易获得单菌落 。
（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量 。
先制作系列浓度梯度并进行显色反应 ， 下表中1 5号比色管的苯酚浓度应分别为_____________ 。
管号123456苯酚浓度（mg/ L）1如果废水为50 mg/ L 苯酚溶液 ， 降解后约有21%的苯酚残留 ， 则需将残留液稀释_____________ （填序号：5 10 20）倍后 ， 再进行比色 。
22. 金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合 。

15、蛋白 ， 某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因 ， 构建转基因工程菌 ， 用于重金属废水的净化处理 。
PCR扩增过程示意图如下 ， 请回答下列问题：（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA ， 通过______________获得______________用于PCR扩增 。
（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2） ， 为方便构建重组质粒 ， 在引物中需要增加适当的______________位点 。
设计引物时需要避免引物之间形成______________ ， 而造成引物自连 。
（3）图中步骤1代表______________ ， 步骤2代表退火 ， 步骤3代表延伸 ， 这三个步骤组成一轮循环 。
（4）PCR扩增时 ， 退火温度的设定是成败的关键 。
退火温度过高会破_________的碱基配对 。
退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关 ， 长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度 。
（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物 ， 则可以采取的改进措施有___________（填序号：升高退火温度降低退火温度重新设计引物 。

来源：(未知)

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