以往,血清的使用有很多,如:小牛血清,马血清,山羊血清,绵羊血清,兔血清,浓度也有很多种,如:1%.2%.或1:5、1:10、和1:20.
必须选择合适的抗体以及对作适当的保存和配制 。
VVI、选择合适的抗体
至今为止,应用于临床的常用抗体有几十种,在这当中又可分为两种类型 。
免疫组化为什么要进行抗原修复?1)福尔马林固定时,组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键,使得不少抗原决定簇被封闭 。
(2)甲醛的聚合作用,使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络,也导致了抗原决定簇被掩盖,这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应 。
经多聚甲醛固定的冰冻切片要做抗原修复吗?【何为抗原修复法】冰冻切片一般不需要抗原修复,石蜡切片需要抗原修复 。目前进行的常规石蜡切片标本,一般均用甲醛固定 。事实上经甲醛固定的部分组织细胞,免疫组化标记敏感性明显降低,其原因为:(1)在用甲醛固定过程中形成醛键而封闭了部分抗原决定簇;(2)甲醛在保存过程中会形成羧甲基,而封闭抗原决定族;(3)在用固定剂固定时,会使蛋白与蛋白之间发生交联,也可能会封闭抗原决定族 。因此在染色时为取得良好的染色效果,必须对有些抗原进行预先修复 。对于冰冻切片用丙酮或甲醛固定效果较好 。因为你是用4%PFA固定还是要考虑做抗原修复的 。修复抗原的方法很多,一常用的抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用的修复液是pH6.0的0.01mol/L的柠檬酸盐缓冲液 。也有人用蒸馏水修复抗原,方法如下:将脱蜡水洗过的切片放入盛有蒸馏水的容器中,置微波炉内高中火5 min煮沸,中低火维持沸腾状态10 min 。
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