献给初学者:酶联免疫吸附实验

小编嘚啵嘚:《献给初学者:酶联免疫吸附实验》是傻大方资讯以迅雷不及掩耳盗铃儿响叮当之势为你带来的,你是继续往下看呢?还是继续往下看呢?健康摘要: 点击上面免费关注疾病查询:腰痛、腰间盘突出、强身锻炼、背痛、风湿、骨质增生、腿痛、乙肝、肝病、养肝、解酒、胃


正文开始:

献给初学者:酶联免疫吸附实验

酶联免疫吸附(ELISA)可以:

01

实验方法原理

双抗体夹心法(常用于测定抗原)

献给初学者:酶联免疫吸附实验

双抗体夹心法测抗原示意图

用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合,经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定,底物降解的量即为欲测抗原的量。

02

实验步骤

材料准备

03

ELISA 的影响因素

固相载体

可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式,这是进行酶标记测定的基本条件。许多物质可作为固相载体,但在 ELISA 中最常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反应板及塑料管。

每批制品在使用前,须经过实验室鉴定,鉴定的方法和标准是对每批购置的微量反应板或塑料管抽样,用 0.2 ug/ml 纯化的正常人 IgG 进行包被,经洗涤后加酶标记抗人球蛋白进行反应,再经孵育洗涤,加底物显色终止反应后,逐孔在酶标比色计中测定其消光值、光密度(OD 值)。

一般认为全板中每两孔间 OD 值的误差不超过 10% 为合格。如果中间孔与四周孔 OD 值相差太大,或者反应板的这一边与另一边凹孔的 OD 值相差大,均不合格。此外,还要检查阳性和阴性参考血清 OD 值是否有明显差别。一般要求有 10 倍左右的差异为合格。

抗原

在 ELISA 中,包被于固相载体表面的抗原或抗体的来源和制备方法对试验结果都有影响。包被所用的抗原必须是可溶性的,且要求是优质和稳定的制剂,纯度和免疫原性要高。而且抗原包被固相载体除浓度外,对时间、温度、PH 均有关系。

温度高(如 37 ℃、45 ℃、或 56 ℃),包被时间可缩短,温度低可延长包被时间。但为了方便起见,通常采用 4℃ 包被过夜,可使抗原吸附得更加完全且均匀。

在用聚苯乙烯或聚乙烯微量反应板或塑料管作固相载体时,在碱性条件下(如 0.1 mol/L、PH 9.6 碳酸盐缓冲液稀释抗原)4 ℃ 包被过夜较为合适。

但在某些试验中,如用 LPS 或毒素蛋白包被时,用 PH 7.2~7.4 PBS 稀释才是满意的。包被特异蛋白质的浓度为 1~10 ug/ml,而对某些病原微生物抗原以 5~20 ug/ml 较为合适,但均应通过滴定。

更多相关问题请戳「阅读原文」

献给初学者:酶联免疫吸附实验

献给初学者:酶联免疫吸附实验