科学院博士手把手教你做免疫组化定量分析简单又实用的秘籍交给你。"

做个生物实验也是够苦逼的啊，不止结果要好看光鲜，还要做定量……也是醉了。明明 western blot 结果做的那么漂亮，一眼就看出来差异了，还需要定量？！思量起来，这个也还算简单，忍了吧。。。

but…辛辛苦苦做的免疫组化（或荧光）也需要定量——你当搬砖就可以随便使唤了吗？花花绿绿，斑斑驳驳，肿么分析？

还好，我有这本秘籍，一定要看完哦。

进入正题

准备工作

首先，你需要下载 imageJ，然后下载 IHC-Toolbox 插件，并放入 imageJ 的安装目录下的 plugins 文件夹下；

送链接：http://imagej.nih.gov/ij/plugins/ihc-toolbox/index.html

开始分析

1. 在菜单栏里选择文件打开，打开实验数据图片（此处所使用图片来自互联网，大家可用自己的数据实战）；然后在 plugins 菜单下 → 选择 IHC Toolbox，打开如下：

2. 选中感兴趣的区域（ROI），然后点击 Training；（这里选择的区域一定要有代表性，范围不可太大，也不能太小）

3. 上步完成后会弹出 Color Chooser 窗口，滑动滑块儿以使感兴趣的区域全部被选中；

4. 调整图片格式，改成 8 bit 灰度图片，彩色的好看但是不支持哦；（你也可以改成 16 bit 的哈，忘了修改软件会蹦出提示的）

调整完后，大概就是酱纸。

5. Image → Adjust → Threshold… 打开调整阈值窗口；

6. 滑动滑块儿使红色覆盖所选区域，其实就是告诉软件你要分析哪些区域，有点像 ps 中的魔棒？… 反正赶脚很傻瓜；

7. 然后就到了黎明前的最后一哆~嗦~了，告诉软件你要分析面积还是灰度值，此处我们以面积为例（一定记得要选中 limited to Threshold 哦，切记！切记！）不蓝，分析的是整个图的面积，就是整个图片的像素长宽之积：1392 x 1040

8. 最后一步就是出数据来 Analyze → Measure，也可以用快捷键 Ctrl + M，然后保存数据就好了，是不是既简单又实用呢？

第一次写教程，心里还有点忐忑呢，没有说清楚的地方希望大家留言交流。你的支持就是我最大的动力。

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作者：wangnan235

图片来源：wangnan235

题图来源：丁香通