1、第六章主要组织相容性复合物主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex , MHC是表达 于脊推动物有核细胞表面的一类具有高度多态性、含有多个基因座位 ， 并紧密连 锁的基因群 。
这些基因表达的蛋白就是主要组织相容性抗原 。
MHC最初是从小鼠中发现的 ， 1948年George snell等在用经典遗传学方法分析肿瘤和其他组织移 植引起的排斥现象时发现 ， 机体识别某一移植物是自身的还是非自身的现象是有 其遗传基础的 。
让同一代小鼠自交 ， 可以得到纯系(inbred strain) ， 在大约20代以后 ， 每一个个体的染色体的等位基因(allele) 都相同 ， 即纯合子 (hom 。

2、ozygous) 。
每一自交品系只表达亲代群体中的一类等位基因 ， 不同的自交品系表达不同类的等位基因 ， 即不同自交系个体之间是同种异型(allotype) 。
George sn ell发现自身或同一自交系中的个体间进行皮肤移植 ， 不出现排斥 (rejection)现象 ， 称为自体移植(autograft) 或同系移植(syngraft) 。
当不同的自交系个体之间进行皮肤移植 ， 即同种异型移植lograft) ， 则出现排斥现象 。
负责识别某一组织是同源的并予以接受 ， 是外来的则加以排斥的基因被称为组织 相容性抗原基因 ， 表达这些抗原的基因就是组织相容性复合物 。
George Snell等鉴定出小鼠的一个遗传区域能导致快 。

3、速排斥 ， 是编码一种称为多态性血型抗原 U的基因 ， 也被称作主要组织相容性一2基因 ， 简称H 2 。
后来Dausset于1958 年在人的白细胞上发现了与小鼠H 2具有同样功能的人类白细胞抗原(humanleukocyte antigen ，HLA) 。
George Snell 和 Dausset 因而于 1980 年获得诺贝尔奖 。
研究表明脊椎动物都具有主要组织相容性复合物 ， 但各种动物的MH(名称 都不一样 ， 表6 1列出了一些常见动物 MHC勺名称 。
ft r ii-iiHc-i *rin?ift. :権闪屮町忙衣気从離蚪辰枇自卫丄团匚？ I円搏” Z为-M FK结瞥的特定化也.6- fl皿不同的MHf杭 。

4、於结售审申洗F采的肮序列分折詰果第二节主要组织相容性抗原基因结构及遗传根据MH（分于结构可以将MH（分子分为I类、U类和川类 ， 每一类分子都有 多个不同基因座位的基因编码 ， 它们结构不同但功能有相似之处 。
如人的I类分 子有A、B、C几个主要基因座位 ， U类分子有 DR DQ DP等主要几个基因座位 。
在每一个人每个基因座许多等位基因片段即复等位基因 ， 由两条同源染色体决定 。
MH（基因在人 体细胞中呈共显性表达 ， 而且不同座位的基因也可同时在一个细胞中表达 。
由于 是复等位基因共显性表达 ， 所以在同一个体细胞表面可存在多种不冋的MHC分子 。
一、MHC勺遗传及多态性1 单元型在每一个个体、每一个基因座位上都 。

5、有两种可能的基因型和表型 ， 当然 可以是相同的 ， 也可以是不同的 。
由于MHCS因位于同一条染色体上 ， 其多基因 座位上的基因型组合相对稳定 ， 很少发生同源染色体间交换 ， 这就构成了以单元 型(haplotype ， 也称单倍型)为特征的遗传 。
同一条染色体上紧密连锁的一系列 等位基因的特殊组合 ， 称为单元型 。
例如某一个体HLA两条染色体的单元型可能 是A2B12和Ai B8,这两个单元型基因存在于同一个体的体细胞中 。
共同组成该个 体的基因型(ge no type) 。
由于HLA是共显性发达 ， 所以个体的表型(phe no type) 和基因型相同 ， 也为 AiAi2B8Bi2 。
2 连锁不平衡及单元型遗传HLA 各基因 。

6、并非完全随机地组成单元型 ，某些基因常紧密的连锁在一起、 而 另 一 些 则 不 常 连 锁 在 起，这 就 呈 现 出 连 锁 不 平 衡 (linkage diaequilibrium) 。
例如：在汉族人群中HLA-A的基因频率为0.30 , %的基因频 率为0.05 ， 如果A、B基因座位上的基因随机组合 ， 则 A2和B46基因组成的单 元型预期频率应该符合 HardyWeinberg平衡定律 。
A2 B46单元型理论上频率 应该为0.30 X 0.05=0.015 ， 但是实际观察值为0. 04 。
这说明HLA-A2和HLA- B46基因之间存在着连锁不平衡 ， 两个数值相差0.04 0.015 =。

7、0.025 。
这个0.025 数值被称为连锁不平衡参数 ， 用表示 。
对于一个随机婚配的群体来说 ，认识和 了解连锁不平衡参数 ，具有一定的实际应用价值 。
在选择器官移植供体时可对单 元型进行推算 。
如已知DR基因型则根据单元型连锁关系可以推测 DC的可能型别 。
这些紧密连锁的MH(单元型各基因通常很少发生交换 ， 并成簇地传递给下一代 ，形成了以单元型为特征的遗传 。
3 .基因的多态性MHC 是目前发现的最具多态性的紧密连锁的基因群 ， 存在于所有脊椎动 物的基因组 。
MH(编码的分子主要分为3类 ， 即I类分子 ， U类分子和川类分子 。
每一类基因都有许多基因座位 。
如人的 HLAI 类基因就有 A、 B、 C、 D、。

8、F、 G、 H等基因座位 。
U类基因至少有14个基因座位 ， 主要基因座位有DR DQ DP等 ，每个座位又有许多等位基因 ， 如人类仅A座位就已经发现至少有55个等位基因 。
这仅是对人类部分群体的初步调查分析结果 。
人群中基因虽具有高度多态性 ，但 每个人对每个基因座位上最多取用两种等位基因 。
这两个等位基因可能相同也可 能不同 。
由干基因座位较多 ，而每一种基因座位又有多种取用的可能性 ，因此这 种多座位及其不同等位基因的组合 ， 可以形成群体中数以百万计的基因型和表 型 。
不同的个体 ， 我们甚至存几万个个体中找不到一对HLA基因型和表型完全相同的人 。
这种高度多态性的基因群的形成是也长期进化过程中基因突变和 。

9、环境中 多样性抗原的选择压力(selective pressure)下形成的 。
已经发现人的HLA的某 些基因型与一些疾病易感性有关 ，而另一些基因型与某些疾病的抗性有关 。
例如： HLA-H类的DRB1* 0401基因与类风湿关节炎易感性成正相关 ， 该基因携带者明 显易患类风湿性关节炎 ， 但是DRB1* 0401基因携带者却对该病有抗性 。
由于MHC分子是抗原递呈和免疫应答中的重要分子 ，环境致病因子抗原的高度多样性及其 区域分布的差异性对脊椎动物群体 MHC形成了选择压力 ， 从而产生高度多态性 ，因此也形成了对环境的多种适应性 。
这对群体进化中种的保存具有重要意义 。
二、小鼠MHC（I+ 2）基因结构小 。

10、鼠是常用的实验动物 ， 所有我们应该对小鼠的MH（即H 2）结构有一定了解 。
1948年 ， George Snell首先把小鼠与组织移植排斥有关的抗原命名为组 织相容性抗原 ， 编码这些抗原的基因称为组织相容性基因（histocompatibilitygene） ， 即H基因 。
由于在先前的研究中发现小鼠血型抗原主要有I、U、M、 W型 ， 而U型被证实就是组织相容型抗原 ， 其基因就是H- 2 。
后来George Snell通过进一步研究确定H-2基因与已知的位于第17号染色体断臂上控制鼠尾的T 1基因连锁（T为有尾 ， t为无尾） 。
证明H 2基因定位于17号染色体断臂上 ，约2000kb长 ， 由4个主要区域组成 ， 即 K、I 。

11、、S D （图6 6） 。
其中I区又可 分为两个亚区（subregion ） ， 即I-A和I-B 。
在每个区或亚区内又有许多基因座 位（locus ） 。
D区有H- 2D和H 2L两个基因座位 。
I A亚区有Aa和AB两个 基因座位 。
I E亚区含Ea和EB两个基因座位 。
S区有6个基因座位 。
从基因 类别来说 ， K和D为MHI类基因 ， I区为U类基因 ， S区为川类基因 ， 主要编 码补体 ， C4 C2、B因子（Bf ） ， 性限制蛋白（Slp ）、肿瘤坏死因子（TNF等 。
IHC I MHC-U(A LtMHC-ID閹电小园主耍纽朝栩容性足合杯;
h-列皓构示意图H- 2单元型（H- 2 haplotype ）纯种小鼠是研究M 。

12、HC勺重要动物模型 。
一个 大约经过20代近亲交配繁殖的小鼠 ， 其中H-2符合物各等位基因连锁在一起 。
这些连锁的H 2各等位基因共同构成小鼠的H 2单元型 。
单元型位于一条染色 体上 ， 并给予一个代号 ， 例如：C57bl/10小鼠的单元型是H 2b ， BALB/C鼠的单 元型是H- 2d （表6 2） 。
了解单元型对研究 MHC勺结构和功能很有帮助 。
小鼠的MHC长度约0.5 1.0厘摩（centimorgan ， cM） 。
不同基因型可出现重组 。
这种重组交换（crossover）可以发生在染色体任何位置 。
可以用不同单 元型的鼠之间交配繁殖 ， 以分析其重组交换值 。
MH（各基因座位之间重组可能产生新的单元型 。
6-2实 。

13、蠟中常用的同系小醜的单元型举元堕客零位基凶kftc*dC57BL6；C57BVIObhb-bbBALB心 DBSddddddAKH;
BA;
C3Hkkkkkkq可qqqqSJLsS8s三、人的MH（ HLA基因结构人的MH（又称HLA基因 ， 位于第六号染色体短臂上 ， 长约 4000kb（相当 于大肠杆菌整个基因组的长度） 。
在经典遗传学中 ， 这么长的基因片段相当于 4cM,这意味着个体MHC之间的杂交有4%以上的重组率 。
HLA基因有几十个基因 座位（图67） 。
按结构功能和组织分布情况不同分为 3类：1 . HLA I类基因在远离着丝点约2000-4000kb的范围内 ， 经典的I类分子基因有 A、B、 C基 。

14、因座位 ， 每个基因座位又有几十个以上的等位基因 ， 见表 63和图6& 在J类区还发现E、F、G H J等基因座位 ， 称为I类样基因（class I - like genes）:它们编码MHI B分子 ， 这些分子也是可以与 B 2m微球蛋白结合的膜 蛋白 ， 确切的功能尚在研究之中 。
2 . HLA-H类基因在近着丝点的1000kb范围内 ， 经典U类分子主要有 DQ DR DP等基因座 位 。
由于U类分子是由两条链（a、B链）编码 。
每条链又有多个基因座位 ， 如： DPA编码DP分子a链 ， 有DPAl和DPA2 DPB编码DP分子B链 ， 又有DPBl和 DPB2这些基因每个座位又可能有许多等位基因 （表6 3） 。
HLAH 。

15、类分子由 a链和B链组成的异二聚体 。
a链基因有4个外显子构成 ， B链基因由6个 外显子构成 。
HLAU类基因具有高度多态性（图68） ， 这些多态性的产生主 要由第二个外显子编码的（a 1或B 1区）氨基酸序列差异性所决定的 。
HLA类星目任|色H【,A- U类呈因位JR冬ffio-7 HL3-I 类基因和 U 类 MPK1SF3 标尺敷字我示聖第六号染色体若妙 的更浸董6-3 HI.A E中的茁因位点111- I 类 Ci 城HLA - ！!区域HLA - CI类区域M ftHLA - AHLA-UKAC2TAP)BDKB1GIACDRB2C4BLMP2E FCHJHLAHLADKB3PRMDRB5。

16、” RB6DKB7PRB8DRB9-DQA1DQA2DQB1DQR2DQB3 DOB DMA PMB DNA-DPA 10PA2 rPBiDPB2HJLM刃ABCDR U DR 0 XJ LXJ p DP u OP PHLjV 1 笑HLA-(!阳ti - FDA主當虽因曜口的寻揄爭国峯忘di：统II敢爭人常和Htl駁出的誓忖曲T解3. HLAH类基因区的 LMF和TAP基因值得重视的是近年来在U类基因区域内发现了多个与内源性抗原加工 处理和递呈有关的基因 。
如：抗原肽运载体基因(tra nsporters of an tigenpeptides， TAP)和蛋白酶体(proteasome)基因 。

17、 ， 即巨大多功能蛋白酶(large multifunctionalproteinase， LMP 或称为低相对分子质量多肽(low molecularmass polypeptide)基因 。
它们的表达与U类基因同受干扰素的调控 ， 且与内源 性抗原加工和递呈有关 。
由于内源性抗原主要由I类基因递呈的 ， 因而说明这些 蛋白的功能与I和U类基因都高度相关 。
LMP是胞质非糖基化蛋白 ， 相对分子质量很大 ， 为5. 8X 105组成的一个形似长筒状的复合物 。
每条多肽链(亚基)相对分子质量约为2.0 X 104- 3.5 X 10 4, 是真核细胞中普遍存在的蛋白酶体 。
这种蛋白酶体有非溶酶体降解蛋白作用 ， 也称多催化活性 。

18、蛋白酶复合物 。
它是一巨大胞内的蛋白酶 ， 是由MHU类区LMP和LMP基因编码的 。
LMP基因的开放阅读框编码一个长 219氨基酸残基的蛋白产 物 。
LMP编码的蛋白质有208个残基 。
内源性抗原指胞质内合成的蛋白抗原、经 过LMP降解成肽段(通常为811肽)后 ， 不具有信号肽(signal peptide)结构 。
这种肽段要进入内质网与新合成 MHI类分子结合需要在TAP的帮助下才能完 成 。
MH( I类分子只有与抗原肽结合后才能表达于细胞表面 ， 将抗原肽递呈给 Tc淋巴细胞 ， 诱发特异性免疫应答 。
有一种 TAP基因突变的B细胞瘤的细胞株 ，其表面则不能表达 MH I类分子 。
而TAP属于ABC(TAP- bin 。

19、 di ngcassette) 超基因家族成员、TAP是位于内质网上的膜蛋白 。
它以TAPI和TAP2异二聚体形式 发挥作用 。
目前已确认的TAP1至少有5种基因型 ， TAP2至少有4种基因型 。
因 此TAP至少有20种表型 。
TAP的mRN长约2. 8kb, TAP1约807个氨基酸残基 ，TAP2则有长链(L)型(约703个残基)和短链(S)型(686个残基)两类 。
不同的TAP 表型对同一种抗原肽的亲和力可能不一样 ，并表现出对不同抗原免疫应答强弱的 差异 。
4. HLA-m类基因在第六号染色体近着丝点1000-2000kb范围内 ， 位于I类基因和U类基因 之间 。
该区域内发现有基因座位 60多个 ， 部分基 。

20、因功能已经清楚 ， 但仍有相当 部分在研究之中 。
已发现的基因有补体C2、C4 Bf(见第四章)、肿瘤坏死因子基因(TNF)、淋巴毒素(LT)、21羟化酶(21 hydroxylaseA、B)基因和热体克蛋 白70基因(heat shock protein70 , HSP70 。
就目前研究结果看 ， m类区基因在 免疫应答和调控中也起着相当重要的作用 ， 值得深入研究 。
四、HLA的发现及基因的命名1958 年 J. Dausset 在多次输过血病人体内检出含白细胞抗体的血清 。
他所 试的 27份这种血清样本中行 20份样本几乎能与所有的供血者的白细胞发生凝集 反应 ， 另外 7 份样本只能与大约 60的法国人的白细 。

21、胞反应 ， 而不能与这7位病人自身的白细胞起凝集反应 。
他把这 7份血清中的抗体称为Mac抗体 。
当Mac 抗原阴性的病人接受Mac抗原输血后便诱发产生抗Mac抗体 。
家系调查中表明 Mac抗原酌遗传遵守孟德尔定律 。
这就是首次发现人的白细胞抗原 ， 后来命名为 HLA A2抗原 。
1964年友Amos倡导下 ， 举行了第一届国际组织相容性专题讨论 会(InternationalHistocompatibilityWorkshop&conference ， IHWC 。
在 1968年第三届IHWA后 ， 在世界卫生组织(WHO的支持下 ， 成立了 HLA命名委员会 。
对HLA特异性命名 ， 通常在基因座位后加上数字 ， 数字代表不同等位 。

22、甚因 ， 如： HLA A2, HLA A11 ， HLA B27, HLA DR4等 。
HLA的定型以往主要有血清学和 细胞学方法 。
有些座位所用的定型方法很局限 ，且仅在小范围内异体等位基因抗 血清定型发现的 ，这些仍需 要进一步 鉴定 ， 则常 在座位 名后加一个 小写 w(workshop) ， 如：Cw2 Bw6 DPw3等 。
命名委员会的任务是根据 HLA研究的不 断进展 ， 确定新发现的座位和等位基因命名 ， 并修订和补充原来的命名 。
1991年第十一届国际HLA专题讨论会 ， 第一次引用了 DNA分型 ， 如：聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR)分型技术 ， 序列 特异性 寡 。

23、核苷 酸探针 (seque nee specific oligo nucleotide probe ，SSOP杂交分型技术 ， 以及 DNA测序(DNAsequencing)分型技术 ， 使HLA分型进入核酸的基因密码分析水平 。
较 以往的以分析蛋白质和细胞功能的免疫学方法为主的分型技术前进了大步 ， DNA分型相对更准确可靠HLA基因型的确定由于DNA序列的分析已经相当精确 ， 每个座位每个型的特 异性通常又有许多等位基因 ， 如 HLA I类等位基因命名 A* 1101、A* 1102、B * 2701 ， 这表示“座位名/* /型特异性/等位基因序号”。
HLAU类基因由于 有编码a链和B链之分 ， 所以基因命名与I 。

24、类不同 ， 在基因座位名上要注明 A（ a链）或B（ B链） 。
有时编码a链或B链各有几个基因座位 ， 则分别以序号 缀后 ， 如： DQA1* 0401 ，DQA2* 0101 ，DQB1x 0201 ，DRBl* 0302 ，DRB3* 0101 等 。
这些通过GenBank都可以检索到DNA序列和蛋白质序列 。
HLAm类抗原主要是一些可溶性分子 ， 其分型不同于HLAI、U类抗原 ， 是由补体遗传专题讨论会 （Complement Genetics Workshop&Conference，CGWC） 命名的 。
第三节MHC的检测原理及应用MHC的检测包括表型（phe no type）检测和基因型（ge no t 。

25、ype）检测 。
对MHC及 其表达产物 的检测无论是对临床分析和实际应用 ，还是免疫遗传学研究都具有重要价值 。
20 世纪80年代前对MHC勺检测是以血清学和细胞学方法为基础的表型分析为主 ，这些经典方法检测准 确性和重复性常令人不太满意 。
由于MHC是共显性基因 ， 基因型通常与表型是一 致的（假基因例外） ， 所以近十几年来血清学和细胞学方法有被 DNA水平上的基因 定型方法取代的趋势 。
基因定型方法在准确性和重复性方面都较好 。
下面以 HLA 为例介绍MH（分型技术及其应用 。
一、HLAI 类抗原的检测I类抗原（A、B C基因座位上）的检测 ， 国际上常规使用补体依赖的微量淋 巴细胞毒试验（complem 。

26、ent dependent cytotoxicity test ， CDC）它是依据型特异性抗体介导的补体系统对靶细胞溶解的原理进行的 。
试验必须有抗HLA标准 血清（抗体） 。
这些标难分型血清中抗体与待检淋巴细胞上相应的HLA结合 ， 使抗体分子的空间构象 （conformation） 改变面暴露补体结合部位 ， 此时加入的补体 （通常是兔补体 ）被活化使淋巴细胞膜上形成孔道面导致细胞死亡 。
随后加人细胞 染液 ， 如伊红或台盼蓝 ， 受损或死亡的细胞可被染色 ， 即为细胞毒阳性 ， 说明待 检个体的HLA抗原型类与已知标准HLA血清型一致 。
如果细胞未受损 ， 活的细胞 不被染色 ， 则为阴性 ， 说明HLA型别与标准血清不一致 。
这种 。

27、方法常遇到的问题是标准血清来源困难及是否标准的问题 。
这些血清多 取自经产妇或接受标准HLA抗原免疫的志愿者血清 。
二、HLAn类抗原的检测U类抗原的DR DQ分型方法与I类基本相同 。
不同的是由于n类抗原主要表 达于 B 细 胞从各种抗原递呈细胞 ，如巨噬细胞等 。
因此在检测时首先要分离这些细胞 ，一 般都用分离的B细胞 。
但由于I类抗原表达于所有的有核细胞 ， 所以B细胞表面 除有n类抗原外 ， 还有I类A、B、C抗原 。
在检测时所用的标准n类 DR DQ分 型血清 ， 必须先用多个个体血小板混合物吸收除去 I 类抗体 。
其余操作方法与 I 类相同 。
对DP和Dw特异性进行检测不能用上述CDC法 ， 要用细胞学方法分 。

28、型 。
方法 的原理基于混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction , MLR 。
同种异体淋 巴细胞的HLA-DP Dw抗原不同时 ， 将两种淋巴细胞混合培养 ， 将会刺激对方细 胞发生分裂增殖反应 ， 通过检测淋巴细胞增殖的程度来了解两者抗原同源性程 度 。
实际操作中常采用单向MLR方法和预致敏淋巴细胞分型法(primed lymphocyte typing，PLT)1 单向 MLR将已知 HLA型别的标准定型细胞 (通常为纯合子分型细胞 ， homozygotetyping cell， HTC事先以丝裂霉素 C(mitomycin C)处理或经2000rad强度的X 射线照射处理 ， 使 。

29、标准细胞失去增殖能力 ， 但仍保持完整的细胞形态和抗原性 。
以此处理过的标准细胞与待检淋巴细胞混合培养5-6d,在终止前16-20 h ， 加3H TdR(氚标胸腺嘧啶核苷) ， 收集细胞 ， 以液体闪烁计数仪测定同位素掺入情 况(cpm数) 。
以处理过的标准细胞与其自身细胞做同样的细胞混合试验为对照 ，计算出刺激指数 SI(stimulation index)。
实验组 cpmSI= 对照组 cpm当SI V2时为阴性 ， 表明二者HLA Dw或 DP型相向 。
同胞兄妹中呈这种阴 性反应的为理想的移植供体 。
如果有一个单元型不一致的同胞兄抹MLR建议的SI 极限值可达 10 。
大于此值则不能用于器官移植供体 。
2 个单 。

30、元型完全不一致 的非亲缘关系个体之间SI值可达25以上 。
此外 ， 也有人用相对应答(RR)为指标 来表示型别差异的情况 。
2 预致敏淋巴细胞分型法 (PLT)单向MLR法操作时间太长 ， 而且 HTC标准细胞来源困难 ， 于是发明了 PLT 分型法 。
该法原理是将标准细胞HTC与另一不相关个体淋巴细胞作单向 MLF法培 养 ， 时间延长到9- 14d ， 反应细胞的分裂增殖逐渐停止 ， 而出现形态上静止的小淋巴记忆细胞 ，称之为处理细胞 。
这种细胞就是预致敏淋巴细胞 。
这种细胞可 以进行冻存备用 。
当这种细胞再次与第一次培养时相同的抗原细胞共培养时 ，则 迅速出现二次反应 。
24h即可表现快速增殖 ， 可以节省大量时间和HTC 。

31、标准细胞 。
结果的分析也用3H-TdR掺入法 ， 但以阳性结果定为与 HTC型别相同(有人 称之为“阳性分型法”) 。
而单向MLR定型法是以阴性结果表明与 HTC型别相同(又 称为“阴性定型法” ) 。
三、HLA基因定型法1991 年第11届国际HLA专题讨论会上提出了 HLA的DNA分型(DNA typing) 方法 ， 这类方法近年来在研究和实际应用方面发展非常快 ，有取代其他方法的趋 势 。
1 限制性内切酶酶切片段长度多态性 (restriction fragment length polymorphism) 检测法不同的HLA基因型的DNA碱基序列是不同的 ， 这些不同的序列可能被不同的 限制性内切酶识别 。

32、 ，则形成不同长度的酶切片段 。
在酶切后电泳并以相应的基因 探针杂交 ，与标准基因型对照 ，即可得知检测的结果 。
以往常采用白细胞基因组 DNA直接酶切并杂交分析 ， 但因基因组太大 ， 太复杂 ， 酶切位点或是太多而使片段混杂或是太少不能精确区分 ，而且必须要与标记的探针杂交分析相结合才能 完成这种方法 ， 实际应用时太繁琐 。
近年来 ， 由于聚合酶链反应(PCR)技术的应用 ， 使方法有了较大进展 。
目前发展起来的PCR- RFLP分型法是一个简便快速的 分型方法 。
首先在要分型的基因两端保守区选择设计一对或几对引物 ， 然后以 PCF扩增该区段的DNA得到等长的DNA扩增片段 。
再选择适当的限制性内切酶 对该片段酶切 ，得 。

33、到不同长度的片段 ，电泳就可直接观察到不同的条带类型 。
从 已知DNA序列即可推测该个体的基因型 。
如果格局与已知的不一致 ， 则可能是一 种新的等位基因 。
2 . PCR-ASO或 PCR- SSO法是PCR方法与等位基因特异性寡核苷酸(allele specific oligonuceotide，ASO探 针或顺序特异性寡核苷酸(seque nee specific oligo nucleotide ，SSO)探针杂交法 。
先以PCF扩增待分析的基因片段 ， 扩增的产物点样固定于尼龙膜(或 硝酸纤维膜 ) ， 然后以同位素或非放射件标记的探针与之杂交 ， 根据阳性斑点判 断个体基因型 。
出了 HLA等位基因非 。

34、常多 ， 就需要很多的探针对每个 DNA样品要 进行多次杂交 ( 甚至十几次 ) 才能完成定型分析 ，操作也十分繁琐 。
于是在此基础 上发展起来一种反向杂交法 (reverse hyhridization)。
将各种不向的探针固定 于同一张膜上 ， 再将PCR产物标记 ， 以PCR物(待检测基因DNA反过来与探针 杂交 。
这样做的好处是只要进行一次杂交 ，即可完成多个等位基因分析 ，但不同探计的杂交条件的统一非常重要（如温度 ， 离子强度等） 。
3 . PCDNA sequencing（即 PCF产物自接 DNA测序）法以PCRT增所要分析的基因片段 ， 然后 ， 直接对 DNA进行序列分析 ， 可以直 接得到基因型别 。
近年 。

35、来由于DNAW序仪的自动化程度不断提高 ， 大大的方便了 HLA的基因分型 。
四、HLA检测的应用HLA的分型和检测对人类免疫遗传学研究非常重要 ， 对了解人类各民族 起源和迁徙及临床医学实践和法医学个体识别都非常重要 。
实际应用中主要有以下几方面：1器官移植配型同种异体器官移植 lograft）时 ， 供体与受体之间HLA不同 ， 则会产生排斥反应 。
因而需要在人群中通过 HLA配型来选择供体 。
同卵双生的同胞之间 HLA型完全相同 ， 移植物可以长期存活 。
在家庭内选择供器官者 ， 两者通常会有 一个单元型相同 ， 排斥反应就会较无亲缘关系的供体弱 。
在具有多个供体可供选 供的情况下 ， 通过HLA定型分析可以选择最人程度相配者 ，。

36、 即同源性最高者 。
有 关问题我们将在后面讨论（见第十章） 。
2 .与疾病易感性的关系早在20世纪60年代后湖 ， 人们就注意到 HLA与某些免疫性疾病相关 ，如90%以上的强直性脊椎炎患者带有 HLA-B27抗原 ， 而正常人B27携带者只有 6%左右 。
类风湿性关节炎病人 DR4基因携带为47% ， 而正常人只有17%（中国人群） 。
世界各国学者大约对500多种疾病进行了关联分析 ， 巳发现有60多种疾 病与HLA有关联 。
这些病大多数病因和机理不清某种疾病与_ HLA型别的相关性通 常用相对危险性（relative risk， RR）来评估 ， 其计算公式为：怜厂沁RR_ 4 氏墀U17病人数 ， c为 不带此抗原的正常 。

37、对照组人数 ， C+为携带此抗原的正常对照组人数 。
R2 1时, 两者无关联 ， 若R：冷4,则认为该病与这种HLA型肯定相关 。
RR值越大 ， 该抗原 携带者患某种病的危险性也越大 。
当 RR值小于1时 ， 表明该基因型对这种病有 抗性 。
表4 中列出了部分疾病与HLA的相关性 。
：Px C+. I -虢原的病人数,式中P+代表HLA与疾病易感性的关系机理仍很不情楚 。
已提出的一些主要的学说有：分子模拟学说 ， 即HLA抗原与致病因子抗原分子相似 ， 因结构相似而遭免疫系 统自身攻击 ， 或因病原分子结构与HLA分子太相似而不能被识别而逃避免疫 ，以 致身体受致病因子攻击；受体学说 ， 认为HLA分子就是某病原的受体；基因 连锁学说 ，。

38、认为还存在其他易感基因 ， 而HLA仅是一个被检出的易感基因连锁的 遗传标志 。
小结 主要组织相容性复合物是脊椎动物体内最复杂又具有高度多态性的基因 群 ， 1948年George Snell首次发现小鼠 MHC即卩H 2 ， 1958年Dausset发现了 人的MHCS卩HLA基因 。
MHC的表达产物称为主要组织相容性抗原 ， MHC抗原是有核细胞表面膜蛋白分 子 ， 对抗原递呈和免疫信号传递起关键作用 。
MHC分子其膜外抗原结合槽可结合 830肽以上长度的抗原肽片段 ， 并与 T细胞表而TCF结合 ， 活化T细胞、启动 免疫应答 。
MH抗原肽复合物对TCR的识别是高度特异性的 ， 抗原肽的高度多 样性相对应于TCR的高度多样性 。

39、 ， 也就是说MH（与某种抗原肽结合只能将信号传 递给某一特定的TCR活化相应的T细胞克隆 ， 是MHC艮制性（restrictsn）识别的概念之一 。
MHC限制性还表现在个体特异性和种的特异性 。
不同个体之间及 不同物种之间MHC差异很大时 ， 则无法形成MH肽一TCR三元体递呈抗原信息 。
MCH的限制性还表现在对自身T细胞亚群识别限制 。
MHC分子主要分为I类和U 类分子 。
I类分子表达在所有有核细胞表面 ， 主要由 a链和非MHC编码的B 2m 构成 ， 其主要功能是递全呈内源性（细胞内合成的）抗原给CD8 T细胞亚群 ， 呈 现MHI类限制性识别 。
U类分子表达于 APC表面（B细胞、单核巨噬细胞等） ，主要将外源性（ 。

【主要组织相容性复合体|主要组织相容性复合物】40、由细胞外经吞噬、胞饮加工的）抗原递呈给CD外Th细胞亚群 ， 呈 现MHU类限制性识别 。
MHC 的遗传特点主要表现为高度多态性 ， 有多个基因座位 ， 每个座位在 群体中又有许多个等位基因 ，且呈共显性表达 。
各基因座位连锁不平衡 ，并以单 元型遗传给下一代 。
MHC的表型又称组织型 ， 器官移植时组织型相同才不会出现 排斥反应 。
MHC勺定型方法有基因定型和表型定型 。
由于 MH（是共显性表达 ， 基 因定型可以代替表型定型 。
表型定型检测方法有CDC法 ， 单向MLR PLT法等 。
DNA基因密码水平的定型检测.主要有 PCASM、PCRELP法及PC DNA 直接测序法 。
研究MHC寸了解免疫应答及抗原递呈的分子机理、器官移植配型与 疾病易感性的关系及法医学个体识别均有重要意义 。
练习I名词解释1. MHC； 2 B 2m； 3 单元型； 4 连锁不平衡； 5 LMP； 6 TAP； 7 MLR； 8 PLT；9 刺激指数； 10 阳性定型法U思考题1. MH I类分子和MHU类分子的结构、功能及表达状况有哪些不同？2你认为MHC勺限制性有哪些内容 ， 并说明其生理意义 。
3. 以MHC抗原及TCR为例解释多态性(polymorphism )和多样性(diversity ) 这两个概念及其生理意义 。
4. HLA I类和HL/U类分子的分型检测方法有何不同 ， 为什么？5. 学习和研究MH(有哪些重要意义 。

来源：(未知)

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标题：主要组织相容性复合体|主要组织相容性复合物