1、细胞生物学主讲：黄小云,1,第三章 细胞生物学研究方法,细胞形态结构的观察方法 细胞组分的分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操作技术,2,第一节 细胞形态结构的观察方法,光学显微镜技术（light microscopy） 电子显微镜技术 (Electro microscopy) 扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope,3,第二节 细胞组分的分析方法,离心分离技术 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 特异蛋白抗原的定位与定性 细胞内特异核酸的定位与定性 放射自显影技术 定量细胞化学分析技术,4,第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术,细胞的培养。

2、细胞工程,5,一、光学显微镜技术（light microscopy,普通复式光学显微镜技术 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） 激光共焦扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） 相差显微镜（phase-contrast microscope） 微分干涉显微镜 （differential interference contrast microscope, DIC,6,二、 电子显微镜技术,电子显微镜的基本知识 电镜与光镜的比较 电子显微镜的基本构造 主要电镜制样技术 负染色技术 冰冻蚀刻技术 超薄切片技术 电镜三维重构技术 扫描电镜（Sc 。

3、anning electron microscope ， SEM） SPM(Scanning probe microscope,7,三、 扫描遂道显微镜,Scanning Probe Microscope,SPM (80年代发展起来的检测样品微观结构的仪器) 包括：STM、AFM、磁力显微镜、摩擦力显微镜等 原理：扫描探针与样品接触或达到很近距离时 ， 即产生彼此间相互作用力 ， 如 量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等 ，并在计算机显示出来 ， 从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等 。
装置：扫描的压电陶瓷 ， 逼近装置 ， 电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统 。
特点：（1 。

4、）可对晶体或非晶体成像 ， 无需复杂计算 ， 且分辨本领高 。
（侧分辨率为0.10.2nm ， 纵分辨率可达0.01nm）； （2）可实时得到样品表面三维图象 ， 可测量厚度信息； （3）可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量 。
（4）可连续成像 ， 进行动态观察 用途：纳米生物学研究领域中的重要工具,在原子水平上揭示样本表面的结构,8,普通复式光学显微镜技术,光镜样本制作 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离,9,荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy,原理与应用 直接荧光标记技术 间接免疫荧光标记技术 在光镜水平用于特异蛋白质 等生物大分子的定性定位： 如绿色荧光蛋白(GF 。

5、P)的应用,10,激光共焦扫描显微镜技术（Laser Scanning Confocal Microscopy,原理 应用： 排除焦平面以外光的干扰 ， 增强 图像反差和提高分辨率(1.41.7) ，可重构样品的三维结构,11,相差显微镜（phase-contrast microscope） 将光程差或相位差转换成振幅差 ， 可用于观察活细胞 微分干涉显微镜（differential-interference microscope） 偏振光经合成后 ， 使样品中厚度上的微小区别转化成 明暗区别 ， 增加了样品反差且具有立体感 。
适于研究 活细胞中较大的细胞器 录像增差显微镜技术（video-enhance mi 。

6、croscopy） 计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活 细胞中的颗粒及细胞器的运动,12,电镜与光镜的比较,13,电镜与光镜光路图比较,14,电子显微镜的基本构造,15,主要电镜制样技术,超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备示意图 负染色技术（Negative staining）与金属投影 染色背景 ， 衬托出样品的精细结构 冰冻蚀刻技术（Freeze etching） （技术示意图） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构 。
快速冷冻深度蚀刻技术（quick freeze deep etching） 电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结 。

7、合而形成的 具有重要应用前景的一门新技术 。
电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合 ， 是当前结构生物学（Structural Biology） 主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段 。
,16,扫描电镜,原理与应用： 电子“探针”扫描 ， 激发样品表面放出二次电子 ， 探测器收集二次电子成象 。
CO 2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张 力问题,17,一、 离心分离技术,用途：于分离细胞器与生物大分子及其复合物 差速离心：分离密度不同的细胞组分 密度梯度离心：精细组分或生物大分子的分离,18,二、 细胞内核酸、蛋白质、 酶、糖与脂类等的显示方法,原理：利用一些显色 。

【细胞生物学|细胞生物学03】