9、菌用)、马铃薯葡萄糖培养基(培养真菌用) 。
本实验中 ， 富集培养时选用上述培养基的液体 培养基 ， 分离、保藏菌株时则采用相应的固体培养基2-3 。
发酵培养基： 蔗糖150g ，尿素1g ，MgSO47H2O 0.5g ，KCl 015g ， KH2PO4 0.08g ， ZnSO47H2O 0.01g ， MnSO4H2O 0.02g ， 蒸馏水1 000mL ， pH值自然 。
1.2 方法 1.2.1 土壤样品的采集及预处理 取自武汉生物工程学院柳园餐厅的生活污水以及餐厅旁的活性污泥用无菌水浸泡几分钟 ， 过滤 ，到入一个250ml已灭菌的锥形瓶中 。
武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 2 1.2.2 富集培养 分别在 。

10、不加琼脂的PDA培养基 ， 高氏一号培养基、查氏培养基、牛肉膏蛋白胨培养基中加入1mL 的土壤悬液 ， 均富集培养两天 ， 编号并注明日期 。
1.2.3 菌种的分离与纯化 (1)稀释培养液 。
用移液管移取1mL的细菌富集培养液于一装有9mL无菌水的试管中 ， 混匀 ， 再 用另一支移液管移取此稀释液1mL于另一装有9mI无菌水的试管中 ， 依次类推将富集培养液逐渐稀 释制成10-210-6各种梯度的培养液 。
其他的富集培养液以同样的方法稀释4 。
(2)平板划线 。
在无菌条件下 ， 用接种环取一环稀释倍数为l0-3的细菌培养液 ， 在其培养基中划 线 ， 平行划三个平板 ， 同样的方法将稀释倍数为10-4、10-5培养液平行划三个平板 ， 三个 。

【微生物|产微生物絮凝剂菌株的筛选及产絮凝剂发酵条件的研究】11、对照 ， 编号 ，注明日期后 ， 倒置在生化培养箱中于37培养2天 。
放线菌 ， 霉菌 ， 真菌以同样的方法操作 ， 于 28 倒置培养57天 。
(3)菌落的选择和挑取 。
将透明圈比较大的菌落进行编号 ， 分别接种于各自的斜面培养基中培 养5 。
1.2.4 初筛和复筛 将分离菌株分别接种到相应的液体培养基中 ， 在30摇床培养48h后 ， 以高岭土悬浊液为模拟 废水 ， 目测分离菌株对高岭土悬浊液的絮凝活性 ， 初步筛选出絮凝活性较好的菌株 。
将初筛菌株分 别接种于装有150mL培养基的250mL三角瓶中 ， 30、150rmin振荡培养 ， 于24h、48h、72h取样 ，测定培养液在不离心和3000rrain离心30min两种情况下 ， 菌株发酵 。

12、液对高岭土悬浊液的絮凝活性 ，进行复筛6-7 。
1.2.5 絮凝活性的测定 絮凝活性用絮凝率来表征 。
在100mL比色管中加入0.4g高岭土、2mL1.0 的CaCl2及2mL纯化培 养的培养液 ， 加蒸馏水至100mL 。
盖上盖子做10次上下自然翻转 ， 转速以每次翻转时气泡上升完毕 为准 。
静置10min ， 取比色管中75mL处的上清液并以蒸馏水为参比溶液 ， 于波长为550nm处测其吸 光度 。
絮凝率的计算公式如下： 絮凝率=(A-B)A100 式中 ， A为原高岭土悬浊液上清液550nm处的吸光度值；B为处理后的高岭土悬浊液上清液550nm处 的吸光度值8-11 。
2 结果与讨论 2.1 菌株分离及初筛结果 本 。

13、实验共分离菌株36株 ， 每种培养基9株 ， 分别命名为P1、P2、P9(PDA培养基) ，N1、N2、N9(牛肉膏蛋白胨培养基) ， C1、C2、C9（查氏培养基），G1、G2、G9（高氏培养基）12-13 。
初筛后有絮凝活性的菌株共10株 ， 其中牛肉膏蛋白胨培养 基1株 ， 为N2 ， 高氏一号培养基3株 ， 分别为G2、G4、G5；查氏培养基6株 ， 分别为 C1、C2、C3、C5、C7、C8；PDA培养基0株 。
武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 3 2.2 复筛结果 复筛结果如表1所示 。
其中絮凝活性最高的为C1 ， 絮凝率为0.712 ， 其次为C2、C8 。
将这三株 菌株重新接种培养 ， 对培养液的发酵活性进行比较 ， 结果 。

14、显示C1菌株沉降速度最快 ， 絮凝率最高 ，且菌株悬液浓度较低 ， 表明该菌株产微生物絮凝剂能力强 ， 且培养液絮凝活性好 。
因此 ， 以该菌株 作为后续研究对象14 。
表1 不同菌株絮凝活性 菌株N2G2G4G5C1C2C3C5C7C8 絮凝率0.280.3080.1020.4720.7120.6210.320.3030.5070.541 2.3 培养条件的优化 2.3.1 培养温度对絮凝剂絮凝率的影响 表2 培养温度对絮凝剂絮凝率的影响 培养温度（）23252730333537 絮凝率0.5110.5240.5880.6920.6530.5470.501 由表2可知 ， 当温度为30 时 ， 絮凝剂絮凝率最大为0. 。

15、692 。
2330之间时 ， 絮凝剂絮凝率随 温度升高而增大 ， 但温度为35时 ， 絮凝剂絮凝率迅速下降 。
这是因为温度过低或过高时 ， 微生物 生长过慢或过快 ， 均不利于絮凝剂的积累15 。
因此 ， 选择培养温度为30 。
2.3.2 培养基初始 pH 值对絮凝剂产生速率的影响 表3 初始pH值对絮凝剂絮凝率的影响 pH 值456789 絮凝率0.4120.5290.6420.7120.6850.594 pH值对微生物的生长和代谢具有很大的影响 。

来源：(未知)

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标题：微生物|产微生物絮凝剂菌株的筛选及产絮凝剂发酵条件的研究( 二 )