1、GB8878185555334563BT9125XW创作肴：凤呜大王*AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备 ， 自动化程度很高 。
AKTA系统依拯不同的 配置 ， 可以分为AKTA EXPLORERx AKTA PILOT. AKTA PURIFIER等多种 型号的设备 。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作 。
1、认识 AKTAoAKTAexplorer是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统 。
该色谱系 统的分离装置 有三个主要组件 ， 在底部平台的左侧整齐堆起（Figi） o它们是：曾物育和填祁pH电导枚刚器UV-90 。

2、0装外桂未厩狂19O-7O0mn.Til 菽丘FIGI、AKTA EXPLORER 主机 Pump-900为双通道高效梯度泵系列 。
AKTAexplorer 100,流速范0.01100 ml/min,压力高达 lOMpa （泵名为 P-901） 。
在 AKTA explore 。
流速范用 0.001-10 ml/min,压力高达 25 Mpa （泵 名为P903 ） 。
Monitor UV-900,同时监控190700 nm范围内高达3个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis） 监测器 。
（针对部分AKTA PURIFIER机型 ， 尚有UPC-900监测器可供选择 ， 光源为汞灯光源 ， 一次可 以监控一个波长 。

3、 ， 安装滤光片后 ， 可以在选择的波长范围内进行切换 。
） Monitor pH/C-900,在线电导和pH监测的组合监测器 。
AKTA explorerFig 2、AKTA EXPLORER 硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig2） 。
组成部件 ， 如混合器、柱及 不同的阀安装在右边部分 。
打开装阀的门可全部看到 。
柱被挂在装阀的门的外侧 。
分离装宜由UNICORN软件控制 。
软件安装于一独立的电脑主机之中 ， 在电脑与色谱系统之间的 通信由数拯采集装置CU950进行控制 。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF按钮 ， 打开色谱系统 ， 然后打开电脑电源 。
待仪器自检 。

4、完 毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁） 。
双击桌而上UNICORN图标 ， 进入操作界 而 。
UNICORN的操作界而分为四个窗口 （Fig3）Synni Control系酉辛纳Erahiation 坛果 JtXcPcrMPShCONr i*AKTAexploreII人汩Wets P L3rPuroWaoribg a Fbn Cxactert R/f 何 PraojjHAli角认从人.F-ROFF3o干QONAnM20:P03A13 A14A15rnct=iA160:POoAA17Ala2.2 准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45pm的滤膜过滤 ， 样品也可高速离心后取上清 。

5、备用 。
当缓冲 液中含有有机溶剂（如乙腊、甲醇） ， 需在使用前用低频超声脱 气10mina2.3 清洗及管道准备首先将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中 ， 将B泵的进液管道（B1）放入高盐溶液 中 ， 在 system control 窗口点击工具栏内的 manual.选择 pump pump wash explorer.选中 Al,Bl 管道为ON, execute泵清洗将自动结束 。
（Fig 4）MIAcxplorax Pu&p Iasi motions /jutouo*iftnais:facedLe wrsvrtcr Riiz wtlt*qrdstedcure mestec unFig 6、 。

6、AKTA Explorer的限压设定操作Fig4、AKTA Explorer的泵清洗操作2.4安装层析柱在 manual 里选择 pump*flowrate,输入一定的低流速（Fig5） insert ;
选择 Alarm&mon alarm pressure,设置high alarm （输入填料或层析柱的耐受压力 ， 以较低者为设置值 ， 具体可在填料 说明书或层析柱说明书中查到）5 insert, execute （ Fig6） 。
待InjectionValve的1号位管道流出水 后接入柱子的柱头 ， 稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池 。
Fig 5、AKTA Explorer的流速设定操作 。

7、25开始纯化：1 )在柱子平衡好之后(电导 ， pH的数值和变化趋势稳泄)即开始上样了 。
此时应将紫外 调零(Fig 7),选择 Alarm&monautozGro, exectueoffyr 1 Al raeliltm IrwrtructioiK?hmnnns OPuro OFbp# H Amr_rtr ， r rr &rr 一5 。
口而言=_尔A A - Mogdj 牯 Of the echxXtc1创 1U*、 *9 扭 eJAjlno retted run)PaATi=rHsrkiOaoU1 FrarU.I Joe, f晔iFig 7、AKTA Explorer的紫外调零操作2)具体上样方式：AK 。

8、TA系统的上样方式比较灵活 ， 可以根据具体样品的条件进行上样 ，包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等 ， 这里以用系统 泵上样为例简单介绍上样过 程 。
点击pause.将A2放入样品中 ， 点击counting待样品上完后 ， 再将A1放入到平衡液中继续 清洗柱子 。
3)洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透11巾洗回基线 。
在manual里选择pump - gradient,按照自己的工艺选择 targetB (100% )和 length (10CV) (Fig8) 。
PupHyx:液浓度心支邛*b Tsgel为溶波B的第 卜玳度百分i匕length%达fifTargetaJ需 的时间 。
$nrcnPinoCa 。

9、TNcde S)fcnPluPirenftfi PiintAxtiEADCfa PscWahRrftar PurgWahBac A 0030J miParsmatcnCbAxo ua*e 伍:七 o chxcc th;
ornff er fcbj 1 bjuxeddjwc rvfrdrji)Fig 8、AKTA Explorer的洗脱条件设左操作4)设定收集：选择Frac-*fractionation_900,输入每管收集体积 ， exectue( Fig 9 )o结束 固定体积收集选择 Frac-*fractionation_stop_900, exectue (Fig 10) Fig 20、A 。

10、KTA Explorer的组分收集停止设庄操作5)清洗泵及卸下层析柱：将A1和B1入 1放入纯水中 ， 启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及 整个管 路 。
然后再将A1和B1人口放入20%乙醇中 ， 同样操作将乙醇冲满整个管路保存 。
再给柱子一 个慢流速 ， 设置系统保护压力 ， 然后先拆柱子的下端 ， 正在滴水的时候将堵头拧上 ， 再拆柱子的 上端 ， 最后拧上上端的堵头 。
整个过程中应 防止气泡进入 。
6)关闭电源：从软件控制系统的第一个窗口 unicorn manager点击退出 ， 其他窗口不能单独关闭 。
然后 关闭AKTA主机电源 ， 关闭电脑电源 。
3、程序设泄操作在method editor窗口点击工具 。

11、栏内的method wizard,弹出窗口界而如Fig 11所示 ， 可以分别 在main selectionx column以及column position三个卜拉菜单中选择所要用到的层析方法、所用到 的层析柱的参数以及所安装的层析柱在柱位选择阀的位宜 ， 选好之后 ， 点击next按钮进入下一步波长 和溶液进口的设(Fig 12),在此可以设立检测的波长 ， 针对AKTA EXPLORER可以一次选择三个波长共同 进行监控 ， 并在此 设泄A泵和B泵的溶液进口 ， 设定好之后 ， 点击next,出现如Fig 13所示窗口 ， 可 以在此设N对层析柱进行平衡的条件 。
OF3wtH F1E. DTPFl fctg $ VW1 。

12、 lr - T IS 2yd 2 K”， 3-皿.V, Zy ， k” !W - TO) wFig 11Fig 12创作褊号 ， GB8878185555334563BT9125XW创作者一：凤呜大王*Fig 13 Fig 14完成之后 ， 点击next出现Fig 14的窗口 ， 在此可以设世上样的条件 ， 可选择的条件包括上样的 方式 ， 如上样环上样以及样品泵上样 ， 对上样的体积也要进行设左 。
如果利用系统泵上样 ， 在此无法进 行设置 ， 不过可以利用A泵和B泵的两个进口在后而的步骤中进行设置 。
在上步设置完成之后 ， 点击NEXT出现如Fig 15所示窗口 ， 这里是针对流穿组分收集所进行一些 设置 ， 针对安装的不同的收集器 ， 具体内 。

13、容可能有些差异 ， 这里显示的界而是在安装了 Frac-950收集 器之后所出现的界而 ， 设置完成点击NEXT出现如Fig 16所示的窗口 ， 设置目标组分收集的一些参数 ，点击NEXT,出现如Fig 17所示的窗口 ， 针对具体的洗脱条件可以进行设置 。
当全部设置完成之后 ， 点击finish,弹出Fig 18所示的窗口 ， 可以再一次对所进行的设置进行进一 步的修改 ， 完成之后点击旦按钮 ， 完成程序存盘操作 。
至此完成洗脱程序的设立工作 ， 在应用自动洗脱 程序时 ， 可在SYSTEM CONTROL窗口点击文件菜单栏中的FILE-Run,在弹出的对话框中选择目标洗脱 程序所在的位宜并执行 ， 之后会依次弹出一些对话框 ， 主要是再次 。

14、确认程序的设置条件 ， 并选择洗脱结 果文件的保存位置 ， 全部设置完之后 ， 洗脱将自动进行 ， 结果将自动的保存在设左的文件夹中 。
B VrecMoialtwFrwUs V.Ivm V)-Fig 15Fig 16E ht” Vtxar4 fat SvxtK: ， yxU!KIHwIUU- T 如阳 ui 。
unrb S - rm?l e即 ,如 CxB 0ci. n 况 18 m BCT06 ， *324 et 。
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15、 17 4、结果的浏览与简单处理Fig 18在纯化完成后* Unicorn软件会自动的按照预先的设卷保存结果文件 ， 如果没有指左 ， 那么结果文件会保存于一个文件俎以manual N JF头的文件中 ，N为系统依次生成的一个1-10之间的数字 。
对于结果的浏览应在evaluation窗口（Fig 19）中进行 ， 打开文件及对文件进行普 通编借的菜单如Fig 20所示 。
rrleilMI !*!Fig 19 Evaluation 窗口9Opun c Sns-.一打升文件或Fig 20纯化结果普通编辑菜单这里已经选择了一个纯化文件 ， 打开后 ， 在结果浏览窗口点击鼠标右键 ， 选择properties,可以禅出如Fig 。

16、 21所示的操作菜单 ， 可以分别对结果进行编辑 ， 如改变曲线的颜色 ， 设上横轴或纵轴的显示区间 ， 进行文本文件的编辑等等 ， 2选择或设置浏览内容:aiiUuuj5,I 11 tirj ERH 2?a n_u xg i d ， a 3 1 Hcadci:CunAc Names: Illi 线名Y-Axis:Y 轴X Axis:X 轴Cunre:选择曲拔Peak Table:设定积分农内容Curve Style and Colour 曲线线形及颜色Edit Text:编釉文本Layout Library:保存浏览格式Fig 214、AKTA蛋白纯化系统的日常维护4.1 每天 ， 当实验完成系统使用结束后 ， 应尽可能避 。

【AKTA|AKTA蛋白纯化系统操作】17、免保存于缓冲液中过夜 ， 尤 以高盐浓度洗脱 缓冲液为甚!假如 ， 不能避免 ， 则紧记次日尽早用System Wash Method完成以蒸馀水将系 统彻底清洗 ， 再予以保存或再更新使用其它缓冲 液 ， 再次投入使用进行实验操作 。
用蒸解水 将余下的缓冲液彻底冲洗出系统 ， 这步骤至关重要 。
此举不但可以避免缓冲液对系统造成腐蚀 机会 ， 甚或因使 用高盐浓度缓冲液保存过久造成盐结晶等的堵塞 ， 对系统构成不必要的损害 和损耗 。
4.2 每周更换润洗缓冲液（20%乙醇） 。
若发现储液瓶液体增多 ， 就说明泵内部有 漏液 ， 需要更 换泵密封圈 。
若发现液体减少 ， 需要检查润洗管接头 ， 如果没 有漏液 ， 则泵膜或密封圈需要 更换 。
4.3 一左要保持实验环境的清洁 ， 以免灰尘造或泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的损坏 。
4.4 在长时间不应用系统进行试验的时候 ， 应将系统管路充满20%的乙醇 ， 并关 闭紫外检测器 ，清洗PH探头,并保存于适当的缓冲液中 。
GB8878185555334563BT9125XW创作者：凤呜大王* 。

稿源：(未知)

【傻大方】网址：/a/2021/0905/0024106784.html

标题：AKTA|AKTA蛋白纯化系统操作