1、ICS 65.020.20B 22DB34安 徽 省 地 方 标 准DB 34/T 1433 2011抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种 实时荧光PCR佥测方法Real-time PCR method for insect-resistant and herbicide-tolerant maize Bt11 and itsderivateshttp: /bzxx 仅供学习交流使用 ， 请勿传播或其他用途2011 - 05 - 11 发布2011 - 06- 11 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 14332011本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草 。
本标准由安徽省技 。

2、术监督局提出 。
本标准由安徽省质量技术监督局归口 。
本标准起草单位：安徽省农业科学院水稻研究所和安徽省标准化研究院 。
本标准主要起草人：汪秀峰、杨剑波、马卉、李莉、张士胜、陆徐忠、倪大虎、宋丰顺、杨亚春、 倪金龙、陈萍、张毅 。
http: /bzxx 仅供学习交流使用 ， 请勿传播或其他用途iDB34/T 143320117抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种实时荧光PCR佥测方法i范围Bt11的实时荧光PCR转化体特异性检测方法 。
Bt11及其衍生品种 ， 以及相关制品中Bt11成分的实时本标准规定了转基因抗虫和耐除草剂玉米 本标准适用于转基因抗虫和耐除草剂玉米 荧光PCR定性检测方法 。
2规范性引用文件下列 。

3、文件对于本文件的应用是必不可少的 。
凡是注日期的引用文件 ， 仅所注日期的版本适用于本文件 。
凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T 672转基因植物及其产品检测通用要求和定义NY/T 673转基因植物及其产品检测抽样NY/T 674转基因植物及其产品检测 DNA提取和纯化农业部869号公告-3-2007 抗虫和耐除草剂玉米BT11及其衍生品种定性PCR方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件 。
3.1基因 zSSIIb zSSIIb gene玉米醇溶蛋白基因 。
3.23.3Bt11转化体特异性序列 event-spec 。

4、ific seq1T1 n /dZX/x j端与玉米基因组的连接区序列 ， 农外源插入载体5uence of Bt11L3z orc -包括外源载体部分序列和玉米基因组部分序列 。
cn仅供学习交流使用 ， 请勿传播或其他用途实时荧光 PCR Real-time PCR通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量的分析 。
3.4阈值 threshold荧光阈值的缺省设置实时荧光PCR中以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 是315个循环的荧光信号的标准偏差的10倍 。
3.5Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环 。

5、数 。
4原理实时荧光PCR技术 ， 是指在PC茨应体系中加入荧光基团 ， 利用荧光信号积累实时监控整个 PCR过程 。
TaqMan荧光PCR技术是以TaqMan荧光探针为基础 ， 该探针为一寡核甘酸 ， 两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团 。
PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针 ， 探针完整时 ， 报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时 ， Taq酶的5-3外切酶活性将探针酶切降解 ， 使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离 ， 从而荧光监测系统可接收到荧光信号 ， 即每扩增一条DNA链 ， 就有一个荧光分子形成 ， 实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步 。
根据玉米内标准基因 zSSIIb和Bt11转化体 。

6、特异性序列 ， 分别设计引物和探针进行 PCR扩增 ，建立玉米内标准基因 zSSIIb和Bt11转化体实时荧光PCR检测方法 ， 根据检测结果判断试样中是否 含有转基因成分Bt11 。
5试剂与材料除非另有说明 ， 仅使用分析纯试剂和重蒸储水或符合GB/T 6682规定的一级水 。
5.1 琼脂糖 。
5.2 70%乙醇(V/V) 。
5.3 10 mg/mL RNase A 将胰 RNAB (RNase A 溶于 10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5)、15 mmol/L NaCl中 ， 配成10 mg/mL的浓度 ， 于100c加热15 min ,缓慢冷却至室温 ， 分装成小份保存于 -20 C 。
5.4 10 m 。

7、ol/L NaOH溶液：在160 mL水中加入80.0 g 氢氧化钠(NaOH ,溶解后再加水定容到 200mL)5.5 500 mmol/L乙二镂四乙酸二钠溶液(pH 8.0):称取乙二钱四乙酸二钠 (EDTA-Na2) 18.6 g ， 力口 入70 mL水中 ， 再加入10 mol/L NaOH溶液 ， 加热溶解后 ， 冷却至室温 ， 再用 10 mol/L NaOH 溶液调 pH 至 8.0,加水定容到 100 mL,在 103.4 kPa (121 C)灭菌 20 min。
I I w Vi 卜 ，if ff I I nJFI wJF I II5.6 TE 缓冲?( pH 8.0) ： 1mol/L T 。

8、ris-HCl (pH 8.0) 10 mL和 500 mmol/L EDTA(pH 8.0)溶液 2 mL 用水定容至1000 mL 。
文砥学匀交流使航请勿转播或其彳也用途5.7 dNTPs混合溶液：将浓度为 10 mmol/L的dATP dCTP dGTP dTTP四种脱氧核糖核甘酸等体积混 合 。

稿源：(未知)

【傻大方】网址：/a/2021/0905/0024106876.html

标题：DB34T1433|DB34T1433-抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种实时荧光PCR检测方法