9、司标记 ， 价格较高；不易找到本底低的探针Real-time PCR 与 RT-PCRt匕较2009-08-20 16:50:02 来源：未知 【大 中小】 评论： 条摘要：Real-time PCR与RT-PC幅两种不同的PC昉法 ， 适用范围 也不同 。
Real-time PCR中文译作实时聚合酶链反应 ， 是一种最新 发展的定量PCRK术 。
该技术借助于荧光信号来检测 PCFT物 ， 一方 面提高了灵敏度 ， 另一方面还可以做到PC陶循环一次就收集一个数 据 ， 建立实时扩Real-time PCR RT-PC幅两种不同的PC昉法 ， 适用范围也不 同 。
Real-time PCR文译作“实时聚合酶链反应” ， 是一种最新发 。

10、展 的定量PCRK术 。
该技术借助于荧光信号来检测 PCFT物 ， 一方面提 高了灵敏度 ， 另一方面还可以做到 PCR循环一次就收集一个数据 ，建立实时扩增曲线 ， 准确地确定 CT值 ， 从而根据CT值确定起始DNA 拷贝数 ， 做到了真正意义上的DNAt量 ， 较以往常用的终点定量的方 法更加准确 。
根据所使用的技术不同 ， 荧光定量PC双可以分为TaqManB针和SYBR Green I荧光染料两种方法 。
Real-time PCR所 采用的专用PCRa能够自动在每个循环的特定阶段对反应体系的荧光强度进行检测 ， 实时的记录荧光强度的改变 ， 从而对样品的浓度进 行精确的定量 。
RT-PCRfb Reverse transcr 。

【realtimePCR|realtimePCR和RT-PCR详解及其区别要点】11、iptionPCR勺简称 ， 中文译作“逆转录聚合酶链反应” ， 是将RNA勺反转录（RT和cDNA的聚合酶链式扩 增（PCR相结合的技术 。
首先经反转录酶的作用从 RN始成cDNA 再以cDNA模板 ， 扩增合成目的片段 。
RT-PC敬术灵敏而且用途广 泛 ， 可用于检测细胞中基因表达水平 ， 细胞中RN隔毒的含量和直接 克隆特定基因的cDNA列 。
作为模板的RN何以是总RNA mRN或 体外转录的RNA物 。
无论使用何种 RNA关键是确保RNA中无RNA 酶和基因组DNA勺污染 。
用于反转录的引物可视实验的具体情况选择 随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种 。
对于短的不具有 发卡结构的真核细胞mRNA三种都 。

12、可 。
但二者的基本原理是相同的 ， 即 PCRK术 。
RT-PCRM理与实验技术2009-08-20 16:25:05 来源：未知 【太 史 小】 评论： 条摘要：一、知识背景：1、基因表达：DNARNAProtein 单拷贝基因 表达存在逐步放大机制 ， 如一个蚕丝心蛋白基因104个丝心蛋白mRNA每个mRNA?活4d,可以合成105个丝心蛋白） 共合成109个丝 心蛋白 。
因此单拷贝基因的mRNA!达水平对于其功能水平的调控是 非常重要的一、知识背景：1、基因表达：DNA RNA Protein单拷贝基因表达存在逐步放大机制 ， 如一个蚕丝心蛋白基因104个丝心蛋白mRNA每个mRNA?活4d,可以合成10 。

13、5个丝心蛋白)共合成109个丝心蛋白 。
因此单拷贝基因的mRNAi达水平对 于其功能水平的调控是非常重要的 。
2、PCRK术(Polymerase chain reaction):即聚合酶链式反应 。
在模板、引物和四种脱氧核甘酸存在的条件下依赖于 DN膘合酶的酶促反应 ， 其特异性由两个人工合成的引物序列决定 。
反应分三步：A变性：通过加热使 DNAX螺旋的氢键断裂 ， 形成单链 DNA B、退火：将反应混合液冷却至某一温度 ， 使引物与模板结合 。
C、延伸：在 DNA聚合酶和dNTPs及Mg2+存在下 ， 退火引物沿53 方向延伸 。
以上三步为一个循环 ， 如此反复 。
3、逆转录酶和RT-PCR逆转录酶(reverse tr 。

14、anscriptase )是存在于 RNAW毒体内的依赖RNA勺DN膘合酶 ， 至少具有以下三种活性：1、依赖RNA勺DNA!合酶活性：以RNAWI板合成cDN祢一条链；2、Rnase水解活性：水解 RNAN煤合体中的RNA3、依赖DNA勺DN膘合酶活性：以第一条 DNA为模板合成互补的 双链cDNA.二、RT-PCR勺准备：1、引物的设计及其原则：1）引物的特异性决定PCR5应特异性 。
因此引物设计是否合理对于 整个实验有着至关重要的影响 。
在引物设计时要充分考虑到可能存在 的同源序列 ， 同种蛋白的不同亚型 ， 不同的 mRN凰切方式以及可能 存在的hnRNA寸引物的特异性的影响 。
尽量选择覆盖相连两个内含 。

15、子 的引物 ， 或者在目的蛋白表达过程中特异存在而在其他亚型中不存在 的内含子 。
2）引物设计原则的把握：引物设计原则包括a、引物长度：一般为1530bp ,引物太短会影响PCR勺特异性 ， 引 物太长PCR勺最适延伸温度会超过 Taq酶的最适温度 ， 也影响反应的 特异性 。
b、碱基分布：四种碱基最好应随机分布 ， 避免喋吟或喀咤的聚集存 在 ， 特别是连续出现3个以上的单一碱基 。

稿源：(未知)

【傻大方】网址：/a/2021/0905/0024107374.html

标题：realtimePCR|realtimePCR和RT-PCR详解及其区别要点( 二 )