核酸染料

核酸染料核酸染料在配置琼脂糖凝胶时融化至60℃时加入,一般是百分之一,比如称0.15克琼脂糖,加15毫升TAE,一般多一点 。加入2ul的核酸染料 。
核酸染料的作用是和链结合,可以帮助成像,方便我们在凝胶成像设备下观看条带 。
倒琼脂糖凝胶时,注意看看卡槽,方向,不要有气泡 。
现在常用的核酸染料有哪几种常用的核酸染料有:
1、EB染料
EB属于核酸分子嵌入剂,通常用于分子遗传学、DNA和染色质结构分析等研究中,特别是国内很多实验室仍在使用EB进行凝胶核酸电泳实验的染色 。
EB是极易渗透细胞膜与胞内DNA嵌合的小分子,它具有平面共轭大环结构,是典型的DNA
分子插入试剂,菲啶环插入到DNA分子的碱基对之间,与DNA嵌合形成稳定的复合物,并影响DNA
的复制,破坏正常的遗传生理现象 。EB作为诱变性的化合物,它在人体中诱导突变的机制是不可逆转的 。
2、GoldView染料
GoldView(GV)是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同 。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,也可用于RNA染色 。
实质上,所谓的Goldview就是吖啶橙,也就是传说中的AO,有一种传统的细胞凋亡试验,采用的染料正是吖啶橙,也就是AO/EB染色试验,EB无法穿透完整的细胞膜,而AO可以穿过细胞膜染上细胞核,以此来区分凋亡和未凋亡的细胞 。
3、GelRed 和 GelGreen染料
GelRed
和GelGreen
【核酸染料】是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂 。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染 。
GelRed
和 GelGreen
的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞,正是这一特性降低了染料的细胞毒性 。不过也正是因为如此,其价格大约是GoldView的十倍左右 。
扩展资料
核酸染料的科研应用:
1、免疫分析
荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间 。
荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上 。免疫荧光标记最常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等 。
2、核酸检测
核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度,就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量,并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析 。
有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等 。
参考资料来源:百度百科-荧光染料
核酸染料加热会失效吗不会失效 。
常用的核酸染料有:
1、EB(溴化乙锭)是高度灵敏的嵌入性芳香族荧光化合物,为强致癌诱变剂,但价格便宜,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的核酸 。
2、GoldView I型/II型染料是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同 。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,也可用于RNA染色 。
3、GelRed和GelGreen属于大分子产品,经过埃姆斯 AMS 和相关测试,结果表明,该染料的诱变性远小于溴化乙锭(EB),是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂 。
4、SYBR Green 和SYBR Gold于1995 年由 Molecular probes 公司推出,是一种高灵敏的核酸染料,稳定性差 。
几种核酸染料的比较1、EB(溴化乙锭)
溴化乙锭是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂,为强致癌诱变剂,但价格便宜 。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性 。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子 。EB的这种特性使其成为一种核酸染料,常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色 。溴化乙锭在紫外区302nm和366nm处有吸收峰,在紫外光的照射下,溴化乙锭可被激发出橙红色的荧光(590nm) 。结合有DNA的溴化乙锭复合物的荧光强度要比没有结合DNA的染料高出20-30倍,因此溴化乙锭可检测到少至10ng的DNA条带,非常灵敏 。
2、Gel Green和Gel Red
由Biotium公司研发推出的EB替代染料,染色效果和EB差不多,在紫外下不容易淬灭,可以用于胶回收 。但价格较贵 。
GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂 。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染 。其特点有: