Imagej分析脑缺血体积百分比
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脑血管疾病是人类发病率最高的疾病之一,模拟临床疾病,制作较为可靠的脑缺血动物模型显得尤为重要。大脑中动脉栓塞法(middle cerebral artery occlusion,MACO)是常用的制备脑缺血再灌注的模型,线栓造成大脑中动脉供血区供血使脑部发生局灶性供血。
灌注取脑切片后进行TTC染色可评价脑缺血体积百分比。TTC是脂溶性光敏感复合物,为呼吸链中吡啶-核苷结构酶系统的质子受体。TTC与政策组织中的脱氢酶反应呈红色,缺血组织内脱氢酶活性下降呈苍白色,如下图所示:
上图将鼠脑切成6个薄片,缺血区体积比例计算公式为:
缺血区体积比=(各切片白色缺血区面积之和)/(各切片脑片面积之和)x 100%
由此我们需要分别计算每个切片缺血区面积和脑片面积。一般情况TTC染色图片拍摄时应保持背景为纯黑,脑片含水会有反光,可先用滤纸吸干水,可在拍摄同时加上一带刻度的尺子(功能类似为标尺)。因为我们所求的是缺血区的体积比,因此单位的意义并不大。
ImageJ(官网:
http://imagej.nih.gov/ij/
)是由National Institutes of Health(NIH)开发的基于java的免费开源图像处理软件,在生物及医学图像分析中起着非常重要的作用。ImageJ官网的界面Download菜单下用户可根据自己系统下载对应版本软件,ImageJ可适用于Mac OS X,Linux以及Windows系统(不受电脑系统限制)。Imagej软件功能强大,今天给大家介绍使用Imagej软件分析脑缺血体积百分比。
分析步骤
1
打开Imagej软件,File,Open,打开待分析图片2
计算各脑片面积(分母)将图片转换为灰度图片,Image,Type,8-bit:
点击Image,Adjust,Threshold进行颜色阈值选定。调节颜色阈值选定(红色代表选中)所有脑片:
点击Analyze,Set Measurements,检查已选择Area与Limit to threshold,即只测量阈值选定范围的面积,否则测量的为整张图片的面积:
点击Analyze,Analyze particles:
选择显示结果及汇总,Display results,Summarize。Show选择显示脑片轮廓,点击OK即可获得以下结果:
6个脑片的面积轮廓及序号:
每个脑片的面积(与上面标记顺序一致):
以及汇总情况:
可知共分析到6个目标,6个脑片的面积总和为30506,即我们计算需要的分母。
3
计算各缺血区面积(分子)重新打开图片,点击Image,Adjust,Threshold进行颜色阈值选定。调节颜色阈值(色度、饱和度和亮度)选定(红色代表选中)所有白色脑缺血区:
点击Analyze,Analyze particles,得到以下结果:
缺血区轮廓及标记的各缺血区面积:
Summary中可知缺血区总面积为9855:
4
缺血区体积比例计算缺血区体积比=(各切片白色缺血区面积之和)/(各切片脑片面积之和)x 100%
缺血区体积比 = 9855/30506 x 100% = 32.3%
扩展
因为计算缺血区体积百分比,故没有进行标尺校正,那么如何校正标尺?
校正标尺:点击Straight工具
、按住Shift在标尺上画直线
Analyze,Set Scale,在已知距离中填入10 μm,选择Global则校正标尺对本次打开所有图片均有效。此时也有Step1中226 x 61 pixels变为下图的40.36 x 10,89 μm。
今天给大家介绍使用Imagej软件分析脑缺血体积百分比,希望对大家有帮助。
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