当具有足量的洗脱液 ， 可将其一系列的稀释液接种于营养培养基中 ， 使部分接种的培养基在随后的培养中不产生可见生长 。
用表现出生长的稀释度 。

18、 ， 估算出样品中或产品取样的绝大部分中存在的存活微生物的数量；关于此估算值 ， 95%的可信区间是相对宽的 。
该估算和其置信界限来自MPN表格（DeMan18） ， 此表是在一定的假设条件下编制的 ， 即根据泊松分布原理 ， 重复取样样品中存在的可存活微生物的数量是围绕一个平均数量分布的 。
MPN方法应用的关键要求是微生物总数在整个（研究中的）产品上随机分布 。
因此 ， 对于液体用的医疗器械、黏性液体、粉末 ， 或在单一产品使用如洗脱液等液体估算生物负载的情况下 ， MPN方法可以有生物负载测定值 。
但是 ， 这种方法并不普遍适用于在固体医疗器械上的生物负载测定 。
典型的情况是 ， 在这些器械上构成低平均值生物负载的若干微生物的分布通常是 。

19、随机的 ， 一个总数的微生物总是有高比例的不可检测的有机物和少量的带“峰值”的微生物（实质构成平均值生物负载） 。
在MPN的应用中 ， “峰值”将会被简单地记录为一个正值 ， 因而 ， 只以公式化的方式构成此平均值 ， 而不是用数字表示 。
这可能导致对生物负载估计过低 ， 而得出一个不符合要求的结果 。
MPN法易于操作 ， 并且该方法是基于统计学 ， 所以它更适用于一般性评估而不是精确测定,29,微生物采集技术和设备,膜过滤法 洗脱液过滤后 ， 将滤器放到适宜的培养基上进行培养 ， 形成可见菌落 ， 是对存活微生物计数的一种有效方法 。
通常 ， 孔径不大于0.45的过滤器适于采集微生物 。
对含有类似纤维状产品残留物等微粒的洗脱液进行膜过滤可能比较 。

20、困难 ， 因微粒会阻塞过滤器 。
膜过滤法更适用于微生物浓度较低的悬液,30,微生物采集技术和设备,平板倾注 使用平板倾注技术 ， 将一定量的悬浮液在在约45的温度与融化的琼脂相混合 ， 然后倾注到平板放至凝固 。
对平板进行培养至菌落形成并进行计数 。
平板涂抹 平板涂抹技术是用涂抹器将一定量悬液涂在固体营养基表面 。
螺旋涂板 螺旋涂板技术运用自动装置将一定量微生物悬液涂在固体培养基表面上 。
悬液涂抹是以递减的速度从培养板中心以螺旋线轨迹向周边运动 。
经过培养后 ， 对全板或部分板 ， 运用专用的计数栅和计数技术来统计原始悬液中的存活微生物数量,31,微生物采集技术和设备,检测微生物的其它方法 估计生物负载时还可使用菌落计 。

21、算以外的其他方法 。
这包括测定新陈代谢物的活性（例如：新陈代谢物测定或落射表面荧光） 。
这些方法称为“间接法” ， 为了建立起与以往确定的存活微生物数量的关系 ， 它们必须对照菌落计数进行校准 。
这些技术的一个主要限制就是需要相对较高的微生物数悬浮在样品洗脱液中 。
一般来说 ， 所检测到的微生物数量的下限超过100 CFU,32,微生物鉴定（一,微生物鉴定的方式和意义 方式 形态鉴定、培养及生理特征、生化特征、 核酸特征鉴定 数值鉴定和自动鉴定 意义 从鉴别污染微生物可了解洁净室清洁 ， 消毒步骤的效性 ， 特别是对消毒剂有效性评估有所帮助 。
微生物鉴别的结果也对调查污染的来源有参考价值,33,常用的微生物操作技术,接种： 。

22、将含有或可能含有微生物的样品或培养物 ， 种入培养基的技术方法 。
斜面培养基接种法、半固体培养基接种法、液体培养基接种法、平板培养基接种法 。
分离：使用一定的分离技术 ， 将混杂存在的微生物尽可能在培养基中分开并且生长 ， 从而获得单一的一种菌株的方法 。
划线分离法、涂布分离法、倾注分离法 培养：通常接种后的培养基都要在适宜的环境中条件下进行培养 。
主要是温度、湿度、培养时间， 特别是氧气和二氧化碳的需求 。
需氧培养法、厌氧培养法、微需氧培养法、二氧化碳培养法,34,常用的微生物操作技术,染色： 原因：微生物细胞含水量一般为80%90% ， 菌细胞对光的吸收和反射与水溶液相近 ， 在光学显微镜下 ， 菌体透明 ， 与背景几乎无差别 ， 故常借助染色使菌体吸着染料产生与背景较明显的差别 。
常用细菌染色法 单染色法：仅使用一种染料 ， 只能观察形态和排列 复染色法：革兰染色法 ， 可将全部细菌分成2类 ， 革兰阳性菌、革兰阴性菌 。

来源：(未知)

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标题：生物|生物负载测定( 四 )