1、实验pH对酶活性的影响和最适pH的测定一、 实验目的1、了解pH对酶的活性的影响机理；2、掌握如何选择酶催化反应的最适pH和获得最适pH条件的确定 。
二、 实验原理酶的生物学特征之一是它对酸碱的敏感性 ， 这表现在酶的活性和稳定性易受环境pH的影响 。
pH对酶的活性的影响极为显著 ， 通常各种酶只在一定的pH范围内才表现出活性 ， 同一种酶在不同的pH值下所表现的活性不同 ， 其表现活性最高时的pH值称为酶的最适pH 。
各种酶在特定条件下都有它各自的最适pH 。
在进行酶学研究时一般都要制作一条pH与酶活性的关系曲线 ， 即保持其他条件恒定 ， 在不同pH条件下测定酶促反应速度 ， 以pH值为横坐标 ， 反应速度为纵坐标作图 。
由此曲线 。

2、 ， 不仅可以了解反应速度随pH值变化的情况 ， 而且可以求得酶的最适pH 。
三、 实验器材与试剂1、试剂：磷酸氢二钠、乙酸钠、磷酸二氢钠、柠檬酸、乙酸 。
2、器材：可见分光光度计、恒温水浴锅、试管、酸度计四、 操作步骤1. 配置缓冲溶液按下表配置缓冲溶液 ， 其溶液pH值以酸度计测定值为准 。
管号0.2mol/L磷酸氢二钠（ml）0.1mol/L柠檬酸钠(ml)缓冲液pH14.304.525.154.845.036.613.396.247.722.286.859.080.927.469.720.288.02. 反应液的配方准备二组各6支试管 ， 第一组6支试管中 ， 在每支都加入4.5ml上表中相应的缓冲液 ， 然后加入 。

【实验|实验pH对酶活性的影响和最适pH的测定】3、一定量浓度的6.5%蔗糖酶溶液1.0ml（此时的蔗糖酶只能用H2O稀释 ， 酶的稀释倍数和加入量要选择适当 ， 以便在当时的实验条件下能得到0.6-1.0的光吸收值A520 。
另一组6支试管也是每支都加入4.5ml上表中相应的缓冲液 ， 但不再加酶而加入等量的去离子水 ， 分别作为测定时的空白对照管 。
所有的试管都用水补足到5.0ml 。
3. 终止反应所有的试管按一定时间间隔加入0.5ml蔗糖（6.5%）开始反应 ， 反应5min后分别加入5.0ml0.1mol/LNaOH溶液 ， 在按测定酶活力的程序操作 ， 测出A520 。
五、 结果与分析以反应速度（葡萄糖量.min-1）为纵坐标 ， 以pH为横坐标 ， 绘制下蔗糖酶活性与pH的关系曲线 。
分析曲线并确定蔗糖酶的最适pH或pH范围 。

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标题：实验|实验pH对酶活性的影响和最适pH的测定