按关键词阅读: 植物 实验 比色 测定 含量 可溶性 组织
1、实验七 植物体内可溶性糖含量的测定(蒽酮法)一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理;掌握分光光度计的使用二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一 , 也是新陈代谢的主要原料和贮存物质 。
不同载培条件 , 不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量 。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定 , 可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低 。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法 , 在强酸性条件下 , 蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸(还原性和非还原性)作用生成蓝绿色的糖醛衍生物 , 其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比 。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应 , 但显现的颜色不同 。
当存在含有较多色氨酸的 。
2、蛋白质时 , 反应不稳定 , 呈现红色 。
上述特定的糖类物质 , 反应较稳定 。
该法特点:灵敏度高 , 测定量少 , 快速方便 。
三、材料、仪器及试剂 1.材料:植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器:分光光度计;恒温水箱;20ml具塞刻度试管(3支) 漏斗;100ml容量瓶;刻度试管;试管架;剪刀;研钵3.试剂 (1)200g/ml标准葡萄糖:AR级葡萄糖100mg , 蒸馏水溶解 , 定容至500ml 。
(2)蒽酮试剂:1g蒽酮 , 用乙酸乙酯溶解 , 定容至50ml , 棕色瓶避光处贮藏;(3)浓硫酸四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管 , 编号 , 按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液 。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试 。
【实验|实验8植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法】3、剂 , 再缓慢地加入5ml浓H2SO4 , 摇匀后 , 打开试管塞 , 置沸水浴中煮沸10分钟 , 取出冷却至室温 , 在620nm波长下比色 , 测各管溶液的光密度值(OD) , 以标准葡萄糖含量为横坐标 , 光密度值为纵坐标 , 作出标准曲线 。
管 号123456标准葡萄糖原液(ml)(200g/ml)00.20.40.60.81.0蒸 馏 水2.01.81.61.41.21.0葡萄糖含量(g)2002.样品中可溶性糖的提取称取1克白菜叶 , 剪碎 , 置于研钵中 , 加入少量蒸馏水 , 研磨成匀浆 , 然后转入20ml刻度试管中 , 用10ml蒸馏水分次洗涤研钵 , 洗液一并转入刻度试管中 。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟 , 冷却后过滤 , 滤液收集于100ml容量瓶 。
4、中 , 用蒸馏水定容至刻度 , 摇匀备用 。
3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中 , 加1ml水和0.5ml蒽酮试剂 。
再缓慢加入5ml浓H2SO4(注意:浓硫酸遇水会产生大量的热!) , 盖上试管塞后 , 轻轻摇匀 , 再置沸水浴中10分钟(比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合 , 并一同于沸水浴保温10分钟) 。
冷却至室温后 , 在波长620nm下比色 , 记录光密度值 。
查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量(g) 。
五、结果计算样品含糖量(g/100g鲜重)=查表所得糖含量(g)稀释倍数100/样品重(g)106六、注意事项(1)加浓H2SO4时应缓慢加入 , 以免产生大量热量而爆沸 , 灼伤皮肤 , 如出现上述情况 , 应迅速用自来水冲洗 。
(2)水浴加热时应打开试管塞 。
七、思考题本法多用于测定什么样品 。
来源:(未知)
【学习资料】网址:/a/2021/0321/0021738497.html
标题:实验|实验8植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法