Southern杂交影响因子目的DNA在总DNA中所占的比例探针的大小和标记效率转移到滤膜上的探针与靶DNA1）、2）、3）、4）、DNA量的同源性般质粒DNA的构型有哪几种？在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点?8.超螺旋质粒 DNA、开环质粒 DNA、线状质粒 DNA在琼脂糖 。

8、凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒DNA线状质粒DNA开环质粒DNA3）胶穿孔4）电泳时间过长第三章基因克隆的酶学基础1、限制性核酸内切酶的类型 ， 基因工程常用的是哪种限制性核酸内切酶？（常用II型）限制性内切酶的种类1IIJ11限制性活性+甲基化酶活性十DNA识别序列+切割特异性随机对ATP依赖性+对Mgg依赖性十蛋白质结构3种不同亚基+专+单一成分+十+切劃位点距识别 位点102北P+十2种不同的亚基2、什么是星活性 ， 产生星活性的因素可能有哪些？在非最适合的条件下酶的识别特异性降低 ， 产生非特异性带 ， 这种活性称星活性 。
产生Star活性的因素：（高浓度甘油 ， 碱性 pH, 。

9、存在Mn2+ ， 低离子强度 ， 低盐浓度 ， 低pH3、结合已做的实验 ， 分析影响酶切的因素 。
1） DNA的纯度：DNA中的杂质如蛋白质、酚、氯仿、乙醇、SDS、EDTA等都会影响酶的 活性 。
2） DNA的甲基化程度 ：dam甲基化酶（修饰GATC中的A） ;
dcm甲基化酶（修饰CCA/TGG 的C） 。
MgCI 2、NaCl/KCl :提供Mg2+和离子强度；Tris-HCl :维持pH ；二硫苏糖醇（DTT ）:保持酶稳定性；牛血清白蛋白BSA等：有助于酶的稳定；巯基乙醇：保持酶的稳定性 ， 防止酶失活37 oC,少数要求 40-65 oC 。
温度：不同的限制性内切酶的最适反应温度不同 。
大多数是 缓冲液（B 。

10、uffer）:是影响限制酶活性的重要因素 。
3）4、4）限制性核酸内切酶命名规则及各字母代表的含义 。
（大写）+空白命名规则：寄主菌属名的第1个字母+种名的前两个字母+菌株或菌型代号 +发现序列（罗马数字）例子：EcoRI （E：属名；co：种名；R:株；I:发现次序）属名种名菌株Haemophifus influenzae d 嗜血流感杆菌d株5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别 。
同尾酶：来源不同 ，识别的序列不同 ， 但能切出相同的粘性末端 ， 连接后不能被相关的酶同时切割 。
同裂酶：识别序列相同 ， 切割位点有些相同 ， 有些不同 。
分完全同裂酶和不完全同裂酶(PS:完全同裂酶：识别位点和切点完全相同 。
不完全同裂酶 。

11、：识别位点相同 ， 但切点不同 。
)6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？ 类型：DNA连接酶和RNA连接酶异同点：相同点：都能以 DNA为模板 ， 从5向3进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应 。
不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸 ， 在 DNA复制中起作用；而 RNA聚合酶 聚合的是核糖核苷酸 ， 在转录中起作用 。
影响因素：(影响因素就四个 ， 后面分析觉得烦的话大家自己看着办啦)1)2)3)4)7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法 。
1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好 。
2、在体系中加一点切载体的酶 ， 只要连接后原来的酶切位点消失 。
这样可避免载体自 连 ， 应该可以 。

12、大大提高平端连接的效率 。
足够多的载体和插入片段是最重要的 平端的连接对于离子浓度很敏感 尽可能缩小连接反应的体积 建议放在四度冰箱连接两天效率更高比3、4、5、6、14度好连接所用的目的片段的状态：工效率：粘性末端 平端(100倍)；工5,突出3 ， 突出；卅端：HaeHIAlulHi nCIISmal连接温度H连接效果最好在 37 C,但形成的互补不稳定；煤佳连接温度：12-16 C,较好的连接效果 ， 互补又较稳定 ； 反应液中的成分：HATP :反复冻熔 ， ATP活性降低 ， ATP溶解度不高 ， 连接缓冲液宜分装；?单价离子：150-200mM NaCI ， 提高连接效果；丰PEG: 5%以下可以提高连接效 。

13、率 插入片段与载体的浓度比例最体 DNA与外源 DNA的分子摩尔比通常为 1 : 3左右 ， 甚至1 ： 10或更高 。
工目的或作用：增加插入片段与载体的接触机会 ， 减少载体自我连接的现象 。
81)2)3)4)5)6)7)基因工程中常用的 DNA聚合酶主要有哪些？ 大肠杆菌DNA聚合酶Klenow fragme ntT7 DNA聚合酶T4 DNA聚合酶修饰过的T7 DNA聚合酶逆转录酶Taq DNA聚合酶第四章基因克隆的载体系统1、作为基因工程载体 ， 其应具备哪些条件？具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；具有合适的筛选标记；具有较高的外源 DNA的载装能力； 具有多克隆位点（MCS）；具有与特 。

来源：(未知)

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标题：基因工程|基因工程章节复习题资料( 二 )