1、基因工程 第一章绪论1、基因工程的含义：按照人们的意愿 ， 进行严密的设计 ， 通过体外 在较短时间内趋于完善 ， 创造出更符合人们需求的新的生物类型 。
2、基因工程的优点：打破物种间基因交流的隔离界限；克服常规育种的周期长 ， 效率低的缺点 ， 定向改造生物性状；可按照人的 意愿去改造物种 。
3、基因工程理论依据：不同基因具有相同的物质基础；基因是可分割的；基因是可以转移的；多肽与基因之间存在对应关系； 遗传密码是通用的；基因可以通过复制传递给下一代 。
注：基因工程及其应用的图解看看DNA重组和转基因等技术 ， 有目的地改造生物种性 ， 使现有的物种第二章DNA重组的相关技术及原理1、重组DNA技术的原理重组DNA技术是指将 。

【基因工程|基因工程总结资料】2、一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组 ， 然后转入另一种生物体（受体）内 ，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序2、碱性SDS法提取质粒DNA原理：强碱使所有DNA变性沉淀 ， 而pH为中性时 ， 质粒 DNA复性快 ， 形成闭合环状从沉淀物中分离 。
3、提取DNA总的原则 保证核酸一级结构的完整性； 其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度； 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子； 其他核酸分子 ， 如 RNA也应尽量去除 。
4、核酸鉴定浓度鉴定纯度鉴定完整性鉴定5、 限制性核酸内切酶:是一类能够识别双链 二酯键断开的内脱氧核 。

3、糖核酸酶 。
6、限制性内切酶的命名 用属名的第一个字母和种名的头两个字母组成大肠杆菌（Escherichia coli ） Eco流感嗜血菌（Haemo philus in flue nzae ） Hin 用一个右下标的大写字母表示菌株或型 。
如DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4-8bp）,并使每条链的一个磷酸3个字母的略语表示寄主菌的物种名 。
Ecok, Eco R （现在都写成平行 ， 如 EcoR） 。
EcoRI, EccRU 如果一种特殊的寄主菌内有几种不同的限制性内切酶 ， 用罗马字母表示 。
如属名种名 株名Haemo philus in flue nzae D 嗜血流感杆菌 D 株 EccRI E 。

4、scherichia coliRIHind in Haem op hilus in flue nsae d 川 Sad （II） Streptomyces achromagenes I （ n ）7、限制性核酸内切酶的作用机制以环状和线形的双链 DNA为底物 ， 在适合的反应条件下 ， 识别一定的核苷酸序列 ， 使两条核糖链上特定位置的磷酸 二酯键断开 ， 产生具有 3 - 0H基团和5 P基团的片段 。
&同裂酶：能识别相同序列但来源不同的两种或多种限制酶 完全同裂酶：识别位点和切点完全相同 。
不完全同裂酶：识别位点相同 ， 但切点不同 。
Hi nd III如Hi nd川和Hsu I 。
女0 Xma 和 Sma 。
9、 。

5、 同尾酶：识别的序列不同 ， 但能切出相同的粘性末端 。
女口BarHI、Bgl n、Bcl I、Xhon等10、 酶活性单位（U）:在最适反应条件下 ， 一个DNA分子上含有一个酶切位点 ， 60 min内切割1也入DNA所需的酶量称为一个单位 。
11、星号（*）活性：如果改变反应条件就会影响酶的识别位点专一性和切割效率 ， 称为星号（*）活性 。
12、基因工程的其他酶(1)(2)性质用途末端终止法测定DNA序列(3)核酸酶S1催化反应类型：ss-DNA;
ss-RNA;
13、聚合酶链式反应 PCR :的技术 。
加入4种物质：(1)(2)(3)(4)作为模板的DNA序列； 与被分离的目的基因两条链TaqDNA聚 合酶 。

6、；dNT P( dAT P, dTT P, dGT P双螺旋变性区PCR技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增(包括分离)一段目的基因各自5端序列相互补的 DNA引物(20个左右碱基的短 DNA单链);
和 dCTP 。
DNA连接酶:DNA连接酶能催化双链 DNA切口处的5-磷酸和3-羟基生成磷酸二酯键 。
；DNA聚合酶(Klenow fragment ) 5 T 3聚合酶活性 。
3 T 5外切酶活性 。
(失去了 5 T 3外切酶活性) 3端补平 DNA的3末端标记 ， 在3隐蔽端加上标记的 dNTR cDNA第二链的合成 双脱氧第一步 第二步 第三步 第四步 第五步16、PCR扩增特异性DNA片段的 。

7、主要条件(1) Taq DNA聚合酶(2)引物(primer)2+(6) Mg 的浓度17、PCR的特点(1)特异性强(2)敏感性高18、电泳的基本原理DNA在中性或偏碱性的缓冲液中带负电 ， 在电泳过程中处于凝胶靠负极端的19、电泳迁移率：与DNA分子的构型和大小有关与DNA分子中的碱基组成和顺序无关DNA分子的构象(型)：1型：超螺旋环状(3)快速相同分子量的DNA:闭合环状卷曲超螺旋迁移最快；20、影响连接反应的因素(1) 插入片段与载体的浓度比例(2) 反应温度 (一般1416C )(3) 反应缓冲液(4)模板(temp late)(5)dNTPs(4)简便n型：带切口环状线性分子次之(1 。

来源：(未知)

【学习资料】网址：/a/2021/0329/0021809343.html

标题：基因工程|基因工程总结资料