单链核酸内切酶：S1核酸酶 ， 来自稻谷曲霉菌 。
基本特性：降解单链DNA 的速度比降解双链 DNA快75000倍 ， 降解单链 DNA的速度比降解单链 RNA快7倍 ， 是 降解单链RNA的核酸内切酶 ， 反应条件：10 - 300 mM 。
RNA 。
单链内切双链外切的核酸酶：BaI31核酸DNA突变 。
核酸修饰酶：末 。

8、端脱氧核苷S1核酸酶的重要用途：在 DNA上定位 酶 ， 来自艾氏交替单胞菌 。
基本用途：诱发酰转移酶（TdT ） ， 来自小牛胸腺 。
基本特性：不需要模板的DNA聚合酶 ， 随机掺入dNTPs 。
碱性磷酸单酯酶：来自小牛胸腺的碱性磷酸单酯酶（CIP） ， 来自大肠杆菌的碱性磷酸单酯酶（BAP） 。
基本用途：催化核酸分子的脱磷作用 ，使DNA或RNA的5 磷酸变为5 -OH 末端 ， 防止载体的自身环化 。
T4-PNP（T4噬菌体多核苷酸激酶） RNA、dNR、NR的5 -OH上加磷 ， 用于探针的末端同位素标记 。
7. 如何防止载体自身环化作用？答：使用碱性磷酸酶处理 ， 去除其样载体DNA分子的两个黏性末端发生退火互补 ， 失去 。

9、了链接能力 ， 的基本特性：在DNA、5末端的磷酸基团 ， 这 不能形成共价环化结构,这种分子是不稳定的 ， 在连接部位容易解链形成开环的线性分子 ， 通过碱性磷酸酶预处理 线性载体 ， 提高插入片段的用量 ， 可以有效防止载体自身环化 。
第三章1. 在基因工程操作中 ， 把能携带外源DNA进入受体细胞的 DNA分子叫载体 。
基因工程对载体的要求：在宿主细胞内能独立复制 ， 有选择性标记 ， 有一段多克隆位点 。
外源DNA插入其中不影响载体的复制 ， 分子量小 ， 拷贝数多 ， 容易从宿主细胞中分离纯化 。
载体的种类：质粒、单链 DNA噬菌体M13、几噬菌体的衍生物2. 质粒:是独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合环状DNA分子 。
存在于细菌 。

10、、霉菌、 蓝藻、酵母等细胞中 。
DNA ） 。
质粒的一般生物学特性：分子小（1-200kb ）、编码基因少、环形状（双链环状 质粒的空间构型： 共价闭合环状 DNA（ ccDNA）即SC构型 ，开环DNA（ ocDNA） 即OC构型 ， 线形DNA （ IDNA ） 。
同一质粒尽管分子量相同 ， 不同的构型电泳迁移率 不同：scDNA最快、l DNA次之、ocDNA最慢 。
质粒的基本特征：质粒的自主复制性 ， 质粒的不相容性 ， 质粒的可转移性 ， 携带特殊的遗传标记 。
（拷贝数：细胞内质粒/染色体数）反应质粒复制的强度 。
质粒独立复制的三个特性：在宿主细胞内 ， 单向 ， 由自主和宿主细胞双重遗传控制 。
质粒的类型：（1）接合型质粒 。

11、：如：F质粒 。
除了带有自我复制所必需的遗传信息外还带有 一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因 。
在天然条件下 ， 能从一个细胞自行转移到另一 个细胞 ， 大部分属于严紧型质粒 。
（2） 2.非接合型质粒：如R质粒（抗性质粒）、Col质粒 。
虽然带有自我复制所必需的遗传信息 ， 但失去了控制细菌配对和质粒接合转移的基因 ， 因 此不能从一个细胞转移到另一个细胞 。
在天然条件下不能自己转移到另一个细胞中 。
大部 分属于松弛型质粒 ， 符合基因工程的安全要求 。
注：基因工程中所用的非接合型质粒载体 缺乏转移所必须的 mob基因 ， 所以不能发生自我转移 。
质粒的复制类型：1.严紧型质粒：拷贝数少 ， 只有1 3份拷贝 。
2.松弛型质粒：拷贝 。

12、数多 ， 有1060份拷贝 。
pSC101、CoLEI 。
第一个1-2个拷贝 ， 它唯一单酶3理想质粒载体的必备条件：常见可用于基因工程的天然质粒有用于基因克隆的天然质粒是 P SC101 ， 是一个严紧型质粒 ， 每个宿主细胞仅有具有多个限制性核酸内切酶的单一酶切位点；另一个天然质粒载体是CoLEI ， 切位点EcoRI位于大肠杆菌素 EI的编码基因内 。
（3）若干DNA质粒载体必须具备的基本条件：（1 ）具有复制起点；（2）具有抗菌素抗性基因；限制性内切酶的单一位点；（4）具有较小的分子量和较高的拷贝数 。
（杀死生长的细菌）,卡那霉素抗性（杀死细菌） ， 四环素抗性（杀 （杀死细菌） ， 氯霉素抗性（杀死生长的细菌） 。
（1） 。

13、PBR322 :松弛型复制、氯霉素可扩增、拷贝数 50 - 100 /多克隆位点：指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制性核酸内切酶酶切位点的 片段 。
抗菌素抗性：氨苄青霉素抗性 死生长的细菌） ， 链霉素抗性3. 重要的大肠杆菌质粒载体：cell、用于基因克隆 。

来源：(未知)

【学习资料】网址：/a/2021/0329/0021809370.html

标题：基因工程|基因工程期末复习资料( 二 )