基因文库构建的一般步骤：染色体DNA大片段的制备；载体与基因组DNA大片段的连接；3. 基因组文库的大小：N=ln（1-P）/ln（1-f）N为重组子 。

20、数量；p为所需要的概率；f为分离基因片段与该生物基因组大小的比值 。
（了解）mRNA的分离纯化；cDNA 合成cDNA ,再将这些cDNA4. 构建cDNA文库的一般步骤：总 RNA （total RNA）提取；的合成 。
cDNA文库：利用某种生物的总 mRNA与载体连接 ， 转入细菌细胞中进行保存和扩增 。
包含了所有编码蛋白质的基cDNA文库的特点：不含内含子序列 。
可以在细菌中直接表达 。
因 。
比DNA文库小的多 ， 容易构建 。
cDNA文库的大小：N=ln（1-p）/（1-1/n）N为克隆数；P为要求的概率；1/n为低丰度 mRNA在总RNA中所占的比例 。
（了解）1.DNA接法：片段的体外连接：粘性末端的连 。

21、接、齐平末端（blunt end）的连接、（DNA接头连DNA连接子法、DNA接头法）体外连接应注意的事项：插入片断与载体的酶切位点互补（注：相同的粘性末端才第六章2. DNA能有效地连接 。
尽量避免平端连接 。
决不能进行非粘性末端连接 。
用相同的酶切 。
用同尾酶切 。
）DNA插入的方向正确；插入基因的开放阅读框（ORF ）正确；防止载体自身环化连接 。
（方法：提高插入片断的用量；用碱性磷酸酶处理载体 。
）3. 感受态细胞：受体细胞处于外源DNA的状态 。
制备原理：一般用 0.01-0.05mol/l氯化钙处理受体细胞 ， 增大细胞的通透性 。
感受态大肠杆菌的制备 ：培养大肠杆菌、OD600至0.3-0.4、On。

22、ice 5-10 min、4C离心收集菌、On ice 30 min、用冰冷的 60mMCaCl2 重悬、4C离心收集菌、用冰冷的 60mMCaCl2 重悬、 4C离心收集菌、用冰冷的60mMCaCl2重悬、分装、-70 C冻存 。
4.外源 DNA 导入细菌的几种方法 :转化、转染、转导 。
转化方法：热休克法、电转化法 。
4. 影响转化率的因素：重组质粒、感受态细胞、 外源基因导入真核细胞：一、导入酵母细胞： 1. 菌株选择； 2. 酵母的转化方法： （ 1）利用 原生质球进行转化、 （2）利用 Li+ 盐进行转化； 3.导入植物细胞方法：叶盘法、电击法； 导入哺乳动物细胞方法：磷酸钙沉淀法、脂质体 。

23、载体法、显微注射法 。
（了解）5. 如果在转化实验中 ，对照组不该长出菌落的平板长出了菌落 ，这种现象说明实验可能存在 哪些问题？ 答：倒平板时培养基温度过高 ， 加入的氨苄青霉素会失效；抗生素添加的 量太少 ， 浓度不够；培养平板灭菌不彻底 ， 存在杂菌污染；培养平板上的部分菌株未转化 成功；感受态细胞受到污染；培养时间过长 ， 可能出现卫星菌落等等 。
6. 基因工程上游工程操作技术：细菌的培养、染色体DNA 的提取、凝胶电泳确认、 PCR 扩增反应（提纯、再次电泳确认） 、 PCR 产物酶切过夜、 PCR/ER 产物电泳过程纯化 。
PBBSK/DH5 a转化子培养、PBBSK质粒提取、质粒的电泳、PBBSK/ 。

24、ER产物、PBBSK/ER 产物电泳 。
两个步骤结合7连接、转化、平板培养、筛选 ， 鉴定重组子1 基因工程操作的三大基本元件是【】I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体A I + II + III B I + III + IV C II + III + IV D II + IV + VE III + IV + V2 根据当今生命科学理论 ， 基因工程的用途是【I 分离纯化基因 II 大量生产生物分子 III 构建新型物种 IVA I + II + III B I + II + IV C I + III + IV D II + III + IV提高基因重组效率E I + II + II 。

25、I + IV3 基因工程的三大理论基石是【 】A经典遗传学、细胞生物学、微生物学B分子遗传学、分子生物学、生化工程学C动物学、植物学、微生物学D 生物化学、生化工程学、化学工程学E生理学、仿生学、免疫学4 根据基因工程的定义 ， 下列各名词中不能替代基因工程的是【 】A基因诱变B分子克隆CDNA重组D遗传工程 E基因无性繁殖5 基因工程的单元操作顺序是【A增 ， 转 ， 检 ， 切 ， 接B切 ， 】接 ， 转 ， 增 ， 检C 接 ， 转,增 ， 检 ， 切D检 ， 切 ， 接 ， 增 ， 转E 切 ， 接,因突变不一定导致其表达产物改变结构E基因具有方向性 。
AEBAB A增 ， 转 ， 检6 生物工程的上游技术是【A基因工程及分离工程B】基因工程及发酵工程C基因工 。

26、程及酶工程D基因工程及细胞工程E基因工7 基因工程作为一种技术诞生于【A上世纪50年代初B 上世纪E 上世纪 90 年代初程及蛋白质工程】60年代初C 上世纪70年代初D 上世纪80年代初8 利用基因工程扩增基因是依据【A基因定向重排B 强化启动基因C 增强子重组D SD顺序的存在E 载体自主复制9 第一个由重组大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是【 生长激素（ Growth hormone ）胰岛素（ Insulin）10干扰素（ Interferon ） 白细胞间溶菌素（ Interleukin ） 生长激素释放抑制素（ Somatostatin）下列有关基因的叙述 ， 错误的是【 】蛋白质是 。

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标题：基因工程|基因工程期末复习资料( 四 )