（2）PUC18 / 19 :拷贝数 2000 - 3000 / cell、装有多克隆位点（ MCS） 正选择颜色标记lacZ、用于基因克隆和测序 。
注：pUC7是最早构建的一种PUC质粒载体 。
PGEM-3Z :多拷贝、装有多克隆位点（ MCS ）、正选择颜色标记 lacZ、用于外源基因的高 效表达 。
克隆载体：指专用于基因或 DNA片段无性 。

14、繁殖的质体载体 。
（名词解释）4. 容菌周期（裂解周期）：感染细菌后立即在菌体内复制和合成蛋白质外壳 ， 重新组装成噬 菌体颗粒 ， 并导致细菌细胞解体 ， 释放出大量子代噬菌体 。
容原性周期：感染细菌后 ， 将 自己的DNA整合到细菌的染色体 DNA中 。
形成这一过程称为溶源化 。
5. 单链环状DNA的丝状大肠杆菌噬菌体：M13、f1、fd噬菌体 。
特点：单链 DNA ;
复制型（RF）是双链环状 DNA ； RF DNA和ssDNA都能转染感受态大 肠杆菌 。
并产生噬菌斑；不存在包装限制；可产生大量的含有外源DNA插入片断的单链分子 ， 便于作探针或测序 。
（1）M13噬菌体基本特性：寄主； DNA长度：6407bp ； D 。

15、NA提纯：容易提取；没有包装限制 。
优点：（1）有MCS ， 便于克隆不同的酶切片段（2） Xgal显色反应 ， 可供直接选 择（3）无包装限制 ， 克隆能力大（4）可以克隆双链 DNA分子中的每一条链 。
缺点：插入 外源DNA后 ， 遗传稳定性显著下降 。
人工染色体：酵母人工染色体（ YAC ）、细菌人工染色体（BAC）、P1派生人工染色体、哺 乳动物人工染色体（MAC ） 。
第四章1. 基因组DNA提取方法：碱抽提法（最常用）、煮沸法、去污剂裂解法 。
碱抽提法提取质粒 DNA原理：闭合环状的质粒 DNA ， 在变性后不会分离 ， 复性快 ， 染色 体线性DNA和或有缺口的质粒 DNA变性后双链分离 ， 难以复性而形成缠绕的结构 ， 与 。

16、蛋 白质一SDS复合物结合在一起 ， 在离心的时候沉淀下去 。
碱抽提法提取质粒 DNA的步骤：溶菌；破膜 ， 蛋白质和 DNA变性；中和；离心除去沉淀； 纯化DNA ;
沉淀DNA 。
所用的试剂作用： 溶菌酶：能水解菌体细胞壁的肽聚糖中的P-1, 4糖苷键 葡萄糖：增加溶液的粘度 ， 维持渗透压 EDTA : Mg2+、Ca 2+的螯合剂 ， 抑制 DNA酶的活性 ， 防 止DNA被酶降解NaOH-SDS : NaOH使DNA双链变性 ， SDS溶解细胞膜蛋白和细胞内 蛋白 ， 使蛋白质变性沉淀 NaAc-HAc缓冲液：用来中和NaOH变性液 ， 使DNA复性 乙 醇:用于沉淀DNARNase A:降解RNA渣滓TE缓冲液： DN 。

17、A保存液 酚-氯仿: 蛋白变性剂 ， 使蛋白质沉淀 。
2. 影响质粒DNA产量的因素：受体菌株；质粒拷贝数；质粒大小 。
（1）.细菌基因组 DNA的制备：（1）细胞裂解（2） DNA纯化（3）沉淀DNA（2）哺乳动物细 胞基因组DNA的抽提：（1）组织粉碎（2）细胞裂解（3）纯化DNA （4）沉淀DNA （5） 除去RNA污染 。
（3）.从植物组织中制备 DNA : （1）组织粉碎（2）细胞裂解（3）纯化 DNA （4）沉淀DNA （5）除去RNA污染 。
-（了解看看）3. DNA的定量和纯度测定：核酸在波长260nm处有最大的吸收峰 ， 蛋白质的最大吸收峰在280nm 。
（注：闭合环状卷曲超螺旋迁移最快 ， 线性 。

18、分子次之 ， 伸展开环状最慢）4. 琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖在水里（或电泳液）中加热到沸点后溶解 ， 冷却后又凝固成均匀的的胶体“胨” 。
琼脂糖的浓度决定凝胶的空隙（密度） ， 空隙大小决定其分辨分子大小的能力 ， 空隙小 ， 分辨率高 ， 空隙大 ， 分辨率低 。
聚丙烯酰胺凝胶电泳：优点是比琼脂糖凝胶的分辨率高的多 。
琼脂糖凝胶电泳：1000 50000bp 。
聚丙烯酰胺凝胶电泳：1 1000bp基因扩增技术-PCR技术；通过加热或变性作用可以使DNA双螺旋的氢键断裂 ， 形成单链DNA称为DNA变性；解除变性条件后 ， 变性的单链可以重新结合起来 ， 形成双链 ， 称DNA复性 。
（退火）应用：核酸的基础研究、序列分析、转基因检测 。
第五章1.。

19、目的基因：准备要分离、改造、扩增或表达的基因 。
基因组DNA片断化：限制性内切酶法、随机片断化、机械切割法 。
化学合成目的基因：（常用的方法）磷酸二酯法、亚磷酸三酯法、固相合成法 。
2. 基因文库：将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片断 ， 并将所有这些片 断都与适当的载体连接 ， 引入相应的宿主细胞中保存和扩增 。
构建基因文库的载体选用：（常用的载体）几载体系列：容量为 24 kP cosmid载体：容 量为50 kb YAC :容量为1 Mb 。

来源：(未知)

【学习资料】网址：/a/2021/0329/0021809370.html

标题：基因工程|基因工程期末复习资料( 三 )