1、基因工程第一章：1. 基因工程：在分子水平上进行的遗传操作 ， 指将一种或多种生物体的基因或基因组提取出来 ， 或者人工合成的基因 ， 按照人们的愿望进行严密的设计 ， 经过体外加工重组 ，转移到另一种生物体的细胞内 ， 使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术 。
供体、受体、载体是重组 DNA 技术的三大基本元件 。
（工具酶也是必备元件 ） 基本用途：大规模生产生物活性物质 ， 设计、构建生物的新性状甚至新物种 。
2. 基因工程研究的主要内容：目的基因的分离与制备 ， DNA 片段和载体的连接 ， 外源 DNA片段引入受体细胞 ， 选择目的基因 ， 目的基因表达 。
3. 基因工程的意义：大规模生产生物分子 ， 设计构建新物种 ， 搜寻、分离 。

2、和鉴定生物体 。
发展前景：农林牧渔业中的应用 ， 工业中的应用 ， 在医学中的应用 。
第二章：（结合课本划线内容）1. 限制性核酸内切酶的发现及其生物功能：识别双链 DNA 分子中的特定序列 ，并切割 DNA双链 ， 主要存在于原核细菌中 ， 帮助细菌限制外来 DNA 的入侵；（发现的现象：寄主细胞 的限制和修饰作用 。
）hsd R:编码限制性核酸内切酶 ， hsd M :编码限制性甲基化酶 ， hsd S:编码限制性酶和甲基化酶的协同表达 。
（限制核酸内切酶类型： I 型 ，II 型 ，III 型；）2. 属名 种名 株名Haemophilusinfluenzae d 嗜血流感杆菌 d 株 先后分离出制酶： HindI 。

3、 HindII HindIII，EcoRI 在抗药性 R 质粒上发现的第一个酶 。
同尾酶：识别不同的序列 ， 能产生相同的黏性末端的酶；同位酶：不同微生物来源的酶 ，能识别相同的序列 ， 切割方式相同或不相同 。
3.II 型限制性核酸内切酶的切割方式： 在识别序列的对称轴上同时切割形成平末端如 在识别序列的双侧末端进行切割 ， 若于对称轴 5 端突出的末端如 EcoRI;
反之产生 出的末端如 PstI 。
限制性核酸内切酶反应的注意事项：限制性核酸内切酶为浓缩酶；浓缩的酶液要用核酸内 切酶缓冲液稀释 ，（不能用水稀释 ， 以免酶变性） ；核酸内切酶在含有 50%甘油的缓冲液中 ，于-20 度稳定保存；反应中尽可 。

4、能少加水 ， 使反应体积减到最小；延长反应时间 ， 使所需酶 量减少 。
影响限制性核酸内切酶活性的因素：酶的缓冲液性质；4. DNA 连接酶基本性质：修复双链3 种限EcoRV;
3 端突DNA 样品的纯度； DNA 样品的甲基化程度； 核酸内切DNA 上缺口处的磷酸二酯键；修复与 RNA 链结合的DNA 分子 。
（注意： DNA 连接酶所连DNA分子上相邻核苷酸之间的切口 ， 即Nick链接 ， 不能链接两条单链 DNA或环化DNA 分子 。
）DNA 连接酶的种类： T4 噬菌体 DNA 连接酶（最常用） 、大DNA 连接酶（最常见） 、T4 噬菌体 RNA 连接酶 。
聚合酶：大肠杆菌DNA聚合酶I的基本性质：5 $ 。

5、 3的DNA聚合酶活性；5 $ 3的3 $5 的核酸外切酶活性 。
用途：主要用于杂交探针的制备 。
DNA 链上缺口处的磷酸二酯键；连接多个平头双链接的是的单链肠杆菌5. DNA核酸外切酶活性；切口平移法是目前实验室中最常用的一种脱氧核糖核酸探针标记法 。
Klenow酶的基本性质：大肠杆菌 DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理 ， 获得N端三分之二的大肽段 ，即为 Klenow 酶； Klenow 酶仍拥有 5 $3 的 DNA 聚合酶活性和 3 $5 的核 酸外切酶活性 ， 但失去了 切酶产生的 5 粘性末端； 终止法测定 DNA 序列 。
T4-DNA酶的基本特性：5 $3 的核酸外切酶活性 。
Klenow 酶 。

6、的基本用途：补平由核酸内DNA 片段的同位素末端标记； cDNA 第二链的合成；双脱氧末端5$ 3的DNA聚合酶活性和3$ 5的核酸外切酶活性；在无dNTP时 ， 可以从任何 3 -OH端外切；在只有一种 dNTP时 ， 外切至互补核苷酸暴露时停止； 在四种dNTP均存在时 ， 聚合活性占主导地位 。
T4-DNA 聚合酶的基本用途：切平由核酸内切酶产生的3粘性末端（注意：该酶也能降解双链DNA ， 只是其活性比单链降解活性低很多）；DNA片段的同位素末端标记 。
反转录酶的基本特性：以RNA为模板聚合cDNA链；双向外切 DNA-RNA 杂合链中的 RNA 链VII反应（ExoVII） ， 大肠杆菌的核酸外切酶III（ 。

7、 ExoIII ） ， 大肠杆菌的核酸外切酶III特核酸外切酶（lExo） ， I核酸外切酶特异性地6. 核酸酶：单链核酸外切酶：核酸外切酶VII 不需要Mg2+ 。
双链核酸外切酶：核酸外切酶 异性地从3 端外切 。
单、双链核酸外切酶：lZn2+必需 ， 最适 pH范围为4.0 -4.3 ， 需要NaCI从5 端外切 。

来源：(未知)

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标题：基因工程|基因工程期末复习资料