（2 ）显色和比色 取3支25 mL刻度试管 ， 编号 ， 分别加入还原糖待测液2 mL ，3， 5-二硝基水杨酸试剂 1.5 mL， 其余操作均与制作标准曲线相同 ， 测定各管的消光值 。
分别在 标准 。

14、曲线上查岀相应还原糖毫克数 ， 计算还原糖百分含量 。
四、结果计算mg式中：C 标准曲线方程求得的还原糖量, V T提取液的体积 ， mL 。
mLV 1显色时吸取样品液体积,W 样品重 ， g。
IV斐林试剂比色法测定还原糖、原理和非还原糖（主要是蔗糖）两类 。
Cu 2+还原成Cu +， 使蓝590 nm波长下比色测定吸光度,植物组织中的可溶性糖可分为还原糖（主要是葡萄糖和果糖）还原糖具有醛基和酮基 ， 在碱性溶液中煮沸 ， 能把斐林试剂中的色的斐林试剂脱色 ， 脱色的程度与溶液中含糖量成正比 ， 在查标准曲线 ， 即可计算岀所测样品中还原糖的含量 。
本方法也可用于测定蔗糖及总糖含量二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料新鲜植物 。

15、样品或烘干粉碎过的植物样品（二）试剂1.斐林试剂A液：40 g CuSO 4 5H 2 O 溶解于蒸馏水定容至 1000 mL。
2.斐林试剂B液：200g 酒石酸钾钠(KNaC 4 H 4 O 6 5H 2 O )与 150g NaOH 溶于蒸馏水中 ， 并定容至1000 mL。
A、B两液分别贮存 ， 使用前等体积混合 。
3.0.1 %葡萄糖标准液：取80 C下烘至恒重的葡萄糖0.1000 g ,加蒸馏水溶解 ， 定容至100mL4. 0.1mol/LNaOH5. 甲基红指示剂：0.1 g 甲基红溶于250 mL 60 %乙醇中 。
6. 10% Pb（Ac） 2 。
7. 饱和 Na 2 SO 4 。
（三）仪器 。

【可溶性|可溶性糖测量方法】16、设备分光光度计 ， 分析天平 ， 离心机 ， 水浴锅 ， 具塞刻度试管 ， 刻度吸管 ， 容量瓶 ， 研钵 。
三、实验步骤1 .标准曲线的制作取7支试管 ， 按表24- 4分别加入各溶液 。
表24-4还原性糖测定时绘制标准曲线的试剂量试剂管号01234560.1 %葡萄糖标准液（ mL ）0123456蒸馏水（mL ）6543210每管含葡萄糖量（mg ）0123456斐林试剂（mL ）4444444将以上各管混合后加塞 ， 于沸水浴中加热15 min 。
取岀后自来水冷却 ， 1500 r/min 离心15min 。
取上清液 ， 用分光光度计在590 nm 波长下比色 ， 以蒸馏水作对照 ， 读取吸光度 。
用空白管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为 。

17、横坐标 ， 对应的糖含量为纵坐标 ， 绘制标准 曲线 。
2.样品中还原糖的提取取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎 ， 称取3.00 g ， 放入研钵中研磨至糊状 ， 用水洗入大试管中 。
体积为1015 mL时 ， 加23滴甲基红指示剂 ， 如呈红色 ， 可用0.1 mol/L 的NaOH中和至微黄色 。
若用风干样品 ， 可称取干粉3.00 g， 先在烧杯中用少量水湿润 ， 然后用水洗入250 mL容量瓶中 ， 如显酸性 ， 可用上法中和 。
将大试管置于80 C的恒温水浴中保温30 min ， 其间摇动数次 ， 以便将还原糖充分提取岀来 。
对含蛋白质较多的样品 ， 此间可加10 % Pb（Ac） 2 ， 除去蛋白质 ， 至不再产生白色絮状沉淀100 mL590 nm 波时 ， 加饱和Na 2 SO 4 除去多余的铅离子 。
30 min 后取岀冷却 ， 将提取液全部转入容量瓶中 。
定容至刻度 ， 摇匀后过滤待测 。
3. 样品测定 吸取6 mL待测液 ， 加4 mL斐林试剂 ， 其他操作与标准曲线相同 ， 在 长下读取吸光度 。
以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度 ， 在标准曲线上查岀糖含 量 。
四、结果计算式中：C 标准曲线方程求得的还原糖量 ， mg 。
V T提取液的体积 ， mL 。
V 1显色时吸取样品液体积 ， mL 。
W 样品重 ， g。
思考题1. 简述苯酚法与蒽酮法测定可溶性糖的基本原理 。
2. 干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？怎样避免 。

来源：(未知)

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标题：可溶性|可溶性糖测量方法( 三 )