按关键词阅读: 测量方法 可溶性
1、实验12植物组织中可溶性糖含量的测定在作物的碳素营养中 , 作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉 。
它们在营养中的作用主要有: 合成纤维素组成细胞壁;转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等;分解产物是其他许多有机 物合成的原料 , 如糖在呼吸过程中形成的有机酸 , 可作为NH 3的受体而转化为氨基酸;糖类作为呼吸基质 , 为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量 。
由于碳水化合物具 有这些重要的作用 , 所以是营养中最基本的物质 , 也是需要量最多的一类 。
I蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下 , 可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛 , 生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮 反应生成蓝绿色糠醛衍生物 , 在一定范围内 , 颜色的深浅 。
2、与糖的含量成正比 , 故可用于糖的定 量测定 。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物 , 不但可以测定戊糖与己糖含量 , 而且可以测所 有寡糖类和多糖类 , 其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖 而发生反应) , 所以用蒽酮法测岀的碳水化合物含量 , 实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物 总量 。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下 , 用蒽酮法可以一次测岀总量 , 省去许多 麻烦 , 因此 , 有特殊的应用价值 。
但在测定水溶性碳水化合物时 , 则应注意切勿将样品的未溶 解残渣加入反应液中 , 不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加 了测定误差 。
此外 , 不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同 ,。
3、果糖显色最深 , 葡萄糖次之 , 半 乳糖、甘露糖较浅 , 五碳糖显色更浅 , 故测定糖的混合物时 , 常因不同糖类的比例不同造成误 差 , 但测定单一糖类时 , 则可避免此种误差 。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620 nm, 故在此波长下进行比色 。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料任何植物鲜样或干样 。
(二)试剂1. 80%乙醇 。
2. 葡萄糖标准溶液(100卩g/mL ):准确称取100 mg分析纯无水葡萄糖 , 溶于蒸馏水并 定容至100 mL, 使用时再稀释 10倍(100卩g/mL ) 。
3 蒽酮试剂:称取 1.0 g 蒽酮 , 溶于80%浓硫酸(将98%浓硫酸稀释 , 把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中)10 。
4、00 mL中 , 冷却至室温 , 贮于具塞棕色瓶内 , 冰箱保存 , 可使用23周 。
(三)仪器设备分光光度计 , 分析天平 , 离心管 , 离心机 , 恒温水浴 , 试管 , 三角瓶 , 移液管(5、1 、0.5mL ) , 剪刀 , 瓷盘 , 玻棒 , 水浴锅 , 电炉 , 漏斗 , 滤纸 。
三、实验步骤1. 样品中可溶性糖的提取 称取剪碎混匀的新鲜样品 0.51.0 g (或干样粉末5100 mg ) , 放入大试管中 , 加入 15 mL蒸馏水 , 在沸水浴中煮沸 20 min , 取岀冷却 , 过滤入 100 mL容量瓶中 , 用蒸馏水冲洗残渣数次 , 定容至刻度 。
2. 标准曲线制作取6支大试管 , 从05分别编号 , 按表 24-1加入各试剂 。
表24-1蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量试 。
5、剂管号012345100卩g/mL葡萄糖溶液(mL )00.20.40.60.81.0蒸馏水(mL )1.00.80.60.40.20蒽酮试剂(mL )5.05.05.05.05.05.0葡萄糖量(卩g )020406080100将各管快速摇动混匀后 , 在沸水浴中煮10 min, 取岀冷却 , 在620 nm 波长下 , 用空白调零测定光密度 , 以光密度为纵坐标 , 含葡萄糖量(卩g )为横坐标绘制标准曲线 。
3 样品测定 取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂5 mL, 同以上操作显色测定光密度 。
重复3次 。
四、结果计算式中:C 从标准曲线查得葡萄糖量 , 卩g 。
V T样品提取液总体积 , mL。
V 1显色时取 。
6、样品液量 , mL 。
W样品重(g ) 。
n苯酚法测定可溶性糖一、原理植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖 。
苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下 , 脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物 , 在10100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比 , 且在485 nm 波长下有最大吸收峰 , 故可用比色法在此波长下测定 。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定 , 方法简单 , 灵敏 度咼 , 实验时基本不受蛋白质存在的影响 , 并且产生的颜色稳定160 min 以上 。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料新鲜的植物叶片 。
(二)试剂1. 90 %苯酚溶液:称取 90 g 苯酚(AR ) ,。
来源:(未知)
【学习资料】网址:/a/2021/0413/0021924538.html
标题:可溶性|可溶性糖测量方法