5.1.1成品、辅料供试液的制备 取供试品 ， 加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液或PH7.2磷酸盐缓冲溶液 ， 或胰酪大豆胨液体培养基或稀释制成1:10供试液 ， 若需要 ， 调节供试液PH至6-8 ， 必要时用同一稀释液将供试液进一步10倍稀释系列 。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液 。
5.1.2内包装膜、袋：取供试品100cm2 ， 剪碎 ， 加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或PH7.2磷酸盐缓冲溶液 ， 或胰酪大豆胨液体培养基 ， 浸泡 ， 振摇 ， 制成1:10供试液 。
若需要 ， 调节供试液PH至6-8 ， 必要时用同一稀释液将供试液进一步1 。

8、0倍稀释系列 。
5.2接种和稀释 按下列要求进行供试液的接种和稀释 ， 制备微生物回收试验用供试液 。
所加菌液的体积应不超过供试液体积的1% 。
为确认供试品中微生物能被充分检出 ， 应首先选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验 。
5.2.1试验组 取上述制备好的供试液 ， 加入试验菌液 ， 混匀 ， 使每1ml供试液所含菌量不大于100cfu 。
5.2.2供试品对照组 取制备好的供试液 ， 以稀释液代替菌液同试验组操作 。
5.2.3菌液对照组 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液 ， 按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验 。
5.3供试品中微生物的回收 表1所列的计数方法适用性试验的各试验菌应逐一进行微生物回收 ， 微生 。

9、物回收采用平皿法 。
5.3.1平皿法 采用倾注法 ， 表1中每株试验菌每种培养基至少制备2个平皿 。
取照上述“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液1ml ， 置直径90mm的无菌平皿中 ， 注入15-20ml温度不超过45熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基 ， 混匀 ， 凝固 ， 倒置培养、计数 。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌液 ， 计算各试验组的平均菌落数 。
5.3.2薄膜过滤法 采用的滤膜孔径不大于0.45um 。
滤膜直径一般为50mm 。
滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌 。
使用时 ， 应保证滤膜在过滤前后的完整性 。
水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜 。
为发挥滤膜的最大过滤效率 ， 应注意保持供试品溶液 。

10、及冲洗液覆盖整个滤膜表面 。
供试液经薄膜过滤后 ， 若需要用冲洗液冲洗滤膜 ， 每张滤膜每次冲洗量不超过100ml ， 总冲洗量不得超过1000ml；以免滤膜上的微生物受损伤 。
取照上述“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml、10cm2的供试品 ， 若供试品中所含菌数校对 ， 供试液可酌情减量） ， 加至适量的稀释液总 ， 混匀 ， 过滤 ， 用适量的冲洗液冲洗滤膜 。
测定需氧菌总数 ， 转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；测定霉菌和酵母菌总数 ， 转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上 ， 按表1规定条件培养、技术 。
每株试验菌每种培养基至少制备1张滤膜 。
同法测定供试品对照组和菌液对照组菌数 。

11、 。
6、结果判断 计数方法适用性试验中 ， 采用平皿法或薄膜过滤法 ， 试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5-2范围内 。
若各试验验菌的回收试验均符合要求 ， 照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数 。
若存在一株或多株试验菌的回收达不到要求 ， 应选择回收最接近要求的方法和试验条件进行供试品检查 。
二 供试品的检查1、检验量 即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2） 。
一般随机抽取不少于2个最小包装的供试品 ， 混合 ， 取10g、10ml或100cm2进行检验 。
2、供试品检查 按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌 。

12、总数的测定 。
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数 。
2.1阴性对照试验 以稀释液代替供试液进行阴性对照试验 ， 阴性对照试验应无菌生长 。
若有菌生长应进行偏差调查 。
2.2平皿法 取规定量的供试品 ， 按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定 ， 每稀释级每种培养基至少制备2个平板 。
2.2.1培养和计数 胰酪大豆胨琼脂培养基平板倒置于3035培养箱中培养35天 。
沙氏葡萄糖琼脂培养基平板倒置于2025培养箱中培养57天 ， 观察菌落生长情况 ， 点计平板上生长的所有菌落数并报告 。

来源：(未知)

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标题：微生物|版微生物限度检验操作规程( 二 )