菌落蔓延成片的平板不宜计数 。
点计菌落数后计算各稀释级供试液的平均 。

【微生物|版微生物限度检验操作规程】13、菌落数 ， 按菌数报告规则报告菌落数 。
若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15 ， 则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上 。
2.2.2菌数报告规则 需氧菌总数宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级 ， 作为菌数报告的依据 。
取最高平均菌落数 ， 计算1g、1ml或10cm2供试品中所含微生物 ， 取两位有效数字报告 。
如各稀释级的平板均无菌落生长 ， 或仅最低稀释级的平板有菌落生长 ， 但平均茵落数小于1时 ， 以小于1乘以最低稀释倍数报告菌数 。
2.3薄膜过滤法 按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试液制备 。
取相当于每张滤膜含1g、1ml或10cm2供试品的供试液 ，。

14、若供试品所含的菌数较多时 ， 可取适宜稀释级的供试液 ， 照方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液中 ， 立即过滤 ， 冲洗 ， 冲洗后取出滤膜 ， 菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上培养 。
2.4培养和计数 培养条件和计数方法同平皿法 ， 每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu 。
2.5菌数报告规则 以相当于1g、1ml或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长 ， 以1报告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10cm2供试品） ， 或1乘以最低稀释倍数的值报告菌数 。
3、结果判断3.1需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真菌菌落数）；霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生 。

15、长的总菌落数（包括细菌菌落数） 。
若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求 ， 可使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定 。
使用选择性培养基时应进行培养基适用性检查 。
3.2各品种项下规定的微生物限度标准解释如下：101cfu：可接受的最大菌数为20；102cfu：可接受的最大菌数为200；103cfu：可接受的最大菌数为2000 ， 以此类推 。
3.3若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查结果均符合该品种项下的 规定 ， 判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定 ， 判供试品不 。

16、符合规定 。
控制菌检查法l、简述控制菌检查法是用于在规定的试验条件下 ， 检查供试品中是否存在某些特定微生物 。
本标准的控制菌为大肠埃希菌CMCC(B) 44102、铜绿假单胞菌 CMCC(B) 10104和金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26003供试品检出控制菌或其他致病菌时 ， 按一次检出结果为准 ， 不再复试 。
供试液制备及实验环境要求同“微生物计数法” 。
2、培养基适用性检查和控制菌检查方法 适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查 。
供试品的控制菌检查方法应进行适用性验证 。
2.1菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋） ， 并采用适宜的菌种保藏技术进行 。

17、保藏 。
金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104大肠埃希菌Escherichia coli CMCC(B) 44102乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）CMCC(B) 50094白色念珠菌（Candida albicans）CMCC(F) 98001生孢梭菌（Clostridium sporogenes）CMCC(B) 649412.2菌液制备 将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体 。

18、培养基上 ，3035培养1824h；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基中 ， 2025培养23天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下3035培养2448h ， 或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中3035培养1824h 。
上述培养物用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液 。
菌液制备后若在室温下放置 ， 应在2小时内使用；若保存在2-8 ， 可在24小时内使用 。
生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液 ， 孢子悬液保存在2-8 ， 在验证过的贮存期内使用 。
2.3阴性对照 为确认试验条件是否符合要求 ， 应进行对照试验 ， 阴性对照试验应无菌生长 。
2.4培养基适用性检 。

19、查 控制菌检查用的培养基应进行培养基适用性检查 。

来源：(未知)

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标题：微生物|版微生物限度检验操作规程( 三 )