1、丛枝菌根研究方法一、检测孢子含量的方法A 湿筛倾注法1. 称取一定重量的土壤样品（最好是取自 15cm 表层植物根系附近的土壤）， 放在容器内用 水浸泡20-30min,使土壤松散 。
如果土壤粘性很大 ， 也可加入各种土壤分散剂 。
2. 选用一套洁净的具有孔径为0.5-0.034mm的土壤筛 ， 依次重叠起来 。
最底层用一物体垫着（如培养皿、木块等物） ,使筛面稍微倾斜 。
3. 用玻璃棒搅动浸泡的水溶液,停置几秒钟后,使大的石砾和杂物沉淀下去,即将悬浮的 土壤溶液慢慢地倒在最上一层孔径最大的土壤筛上 。
倾倒时,最好集中倒在筛面的一个点上, 不要使整个筛面都沾有土壤溶液 。
4. 用清水依次轻轻冲洗停留在筛面上的筛 。

【菌根|丛枝菌根侵染率研究】2、出物,以免在上层粗筛面的剩留物中夹藏有VA菌根真菌孢子 。
5. 用洗瓶将停留在筛面上的筛出物轻轻冲洗到一个清洁的培养皿里面,再将滤液通过细筛并用水冲洗 。
在冲下来的筛出物中,除有许多细的沙砾和杂质外,就含有VA 菌根真菌的不同直径的孢子 。
6. 将含有筛出物的培养皿放在双目实体解剖显微镜下观察 。
B 蔗糖离心法1. 称取10 g菌剂 ， 置入大烧杯中加 500 ml水 ， 搅拌 ， 静置10 So2. 先后过 80 目分样筛、 400 目分样筛,将 400 目筛子上的残余物用药匙转入 50ml 离心管中 ， 后用清水冲洗筛子 ， 将残余物全部转入离心管中 ， 配平 ， 3000转/min离心10 min 。
（注分样筛最好直径为 1 。

3、2 cm 左右,便于下面放置烧杯过筛）3. 去掉上清液,在离心管中加入预先配制好的质量分数为50%的蔗糖溶液,玻璃棒搅匀,配平 ， 3000转/min离心10 min （注意离心前离心管壁上不能有残余物） 。
4. 将 400目筛子呈一斜面放置,离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧,用水将筛子上的残留物轻轻洗入划线培养皿中 。
（注意水不能加太多以防影响检测,培养皿划线便于统计） 。
5. 解剖镜镜检统计培养皿中的孢子数目,计算出菌剂中的孢子含量 。
注：溶于蔗糖溶液中的孢子仍可进行接种 。
A. Gerdema nn J W, Nicols on T H,1963. Spores of mycorrhizal en do 。

4、g one species extracted from soil by wet sieving and decanting. Transactions of the British Mycological Society, 46: 235-244B .刘润进 ， 李晓林.2000.丛枝菌根及其应用北京：科学出版社：190-194二、检测菌根侵染率的方法（曲利苯蓝染色改良法）Phillips J M ，Hayman D S, 1970. Improved procedures for clearing and staining parasitic and vesicular-arbuscular。

5、mycorrhizal fungi for rapid assessme nt of infection. Tran sact ions of the British Mycological Society, 55: 158161挑根一碱液软化一酸化一染色一脱色一制片、镜检1.将洗净的粗细合适的根系剪成1 cm左右的根段至于三角瓶中 。
2加入10% KOH在90C的水浴锅中染色 4560 min（去除细胞质 ， 便于染色 。
一般幼根需要时间较短约0.5 h,老根需要时间长约 1 h,以根系相对透明为标准） 。
3. 弃去碱液 ， 用清水洗35次（晾至室温后再冲洗） ， 加入2%盐酸室温下酸化 5 min 。
4加入0 。

6、.05%曲利苯蓝于90C水浴锅中染色 30min 。
5去除曲利苯蓝后 ， 弃去溶液后用自来水冲洗 ， 加入乳酸甘油溶液（1:1:1室温下脱色24h,（晾至室温后再冲洗 ， 也可直接脱色） 。
6用镊子夹取15条排列在载玻片上 ， 每个样 30条2个片 ， 显微镜镜检（10X 10） 。
说明：常规制片用水即可 ， 或封固剂（聚乙烯醇1.66g,甘油1 ml ， 孚L酸20ml ， 蒸馏水10ml）制片片子可以保存较长时间 ， 但容易产生气泡 ， 经脱色后的植物根系可以在甘油中保存数月 。
三、统计方法Estimatio n of mycorrhizal coloni zati on accord ing tTrouvelot et al丛枝菌根真 。

7、菌侵染性的评估方法（Trourelot等 ， 1986）? Trouvelot A, Kough JL & Gianin azzi-Pears on V （1986） Mesure du taux de mycorhizati onVA d un syst radimelaire. Recherche de me thodes d estimation ayant une significationfonctionn elle. In : Physiological and Gen etical Aspects of Mycorrhizae, V. Gianin azzi-Pears on and 。

8、 S.Gia nin azzi （eds.）. INRA Press, Paris, pp. 217-221.1. 将 15个根段固定在 1 张载玻片上 ，30个染色后的植物须根根段制 2 个片子2. 在显微镜下观察这些根段 ， 按照图 1 的分类方法确定分级 ， 这种分级包括对每 个根段菌根侵染率水平和丛枝丰度的快速评估 。
3. 将观测值代入计算机软件“Mycocale ”中即可按照以下相关公式计算出相关的菌根侵染度参数：F,%M,%m, %&和 %A (Trouvelot et al 1986)o Frequency of mycorrhiza in the root system根系中的菌根侵染率 。

稿源：(未知)

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标题：菌根|丛枝菌根侵染率研究