【CAT|CAT酶活性测定】1、植物组织中过氧化氢酶的活性测定一紫外吸收法【原理】H2Q在240nm波长下有强烈吸收 ， 过氧化氢酶能分解过氧化氢 ， 使反应溶?吸光度（A240） 随反应时间而降低 。
根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性 。
【仪器与用具】紫外分光光度计；冷冻离心机；研钵；容量瓶；刻度吸管；恒温水浴；分析天平【试剂】1. 0.05mol/L pH7.0磷酸缓冲液2. 0.2mol/L H 2Q溶液：30% H2Q 11.36ml溶于磷酸缓冲液中 ， 定量至 250ml 。
3. 0.05 mol/LTris-Hcl缓冲?夜（pH7.0）【材料】正常生长或经逆境处理的新鲜植物组织【方法步骤】1 .酶液提取：称取剪碎混匀 。

2、的植物样品（如叶片等）1.00g置与预冷的研钵中 ， 加入适量预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂冰浴研磨成匀浆后 ， 转入 10ml容量瓶中 ， 并用缓 冲液冲洗研钵数次 ， 合并冲洗液 ， 并定容到10ml 。
取提取液5ml于离心管中 ， 在4C、15000g 下离心15min,上清液即为过氧化氢酶粗提液 。
4c下保存备用 。
2 .CAT活性测定（1）取10ml具塞试管 ， 加2ml酶提取液于沸水浴中加热煮死 ， 冷却备用 。
（2）取10ml具塞试管 ， 3支为测定管（3个重复） ， 1支为对照 ， 按下表加入试剂：表40-2 紫外吸收法测定HQ样品液配置表管号S1S2S3S4Tris-Hcl1.01.01.01.0粗酶液（ml）0.10 。

3、.10.10.1（煮死酶液）蒸储水（ml）1.7 (4)1.7(4)1.7(4)1.7(4)将上述4支试管于25c水浴中预热3min后 ， 逐管加入0.2ml 0.2mol/L 的H2Q溶液 ， 每 加完一管立即在紫外分光光度计上测定A240（蒸储水调零） ， 每隔30s读数一次 ， 共测3min,记录4支试管的测定值 。
（需用石英比色杯）3 .结果计算：以1min内从40降低0.1 （三支测定管的平均值）的酶量为1个酶活单位（u）,先求出3支测定管各自1min内A240降低值 ， 按下式计算 CAT活性 。
A240 VT过氧化氢酶活性（u/gFW/min尸0.1 V1 t FW（Asi As2+AS3）式中A240 = Aso-3一a so一加入煮死酶液的对照管吸光值;
S1, A S2,AS3一样品测定管吸光值；Vt 酶提取液总体积（ ml ） ；V1测定时用酶液体积（ml ） ；FW 样品鲜重（ g ） ；0.1A240每下降0.1为1个酶活单位（U）；t 加过氧化氢到最后一次读数时间（ min ）。
【注意事项】凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰 。
【思考题】1. 影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些 ?2. 过氧化氢酶与哪些生化过程有关?（注：专业文档是经验性极强的领域 ， 无法思考和涵盖全面 ， 素材和资料部分 来自网络 ， 供参考 。
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稿源：(未知)

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标题：CAT|CAT酶活性测定