赭曲霉毒素的作用机理?( 二 )

2023-02-16 生活百科小知识

临床影响
赭曲霉毒素中毒症的主要症状为：生长迟缓，饲料效率降低。肝脏受损，但主要是对肾脏的影响，导致肾间质纤维化。饮水量增加（剧渴），导致排尿增多（多尿症），这是赭曲霉毒素中毒症的一大特点。幼龄生长猪会出现肾周水肿，并伴有僵硬。胃溃疡也是常见的症状。公猪的精子质量降低，受精率下降，最终导致整体繁殖性能下降。
中毒者的临床表现
生产性能下降（饲料采食量，生长速度，饲料效率）
肾脏苍白、变大=肾小管变性，肾间质纤维化
肾功能受损=高蛋白血症，氮血症
肾衰竭=死亡
饮水量增加（剧渴），排尿增多（多尿症）
细胞免疫抑制=对感染的易感性大大增加
公猪精子质量降低=受精率下降=繁殖性能降低
仔猪出现水肿=弓背僵直，步调失调
胃溃疡 1主题内容与适用范围
本标准规定了谷物和大豆中赭曲霉毒素A的薄层色谱测定方法。
本标准适用于小麦、玉米和大豆中赭曲霉毒素A的测定。
在薄层板上赭曲霉毒素A的最低检出量为4ng 。该方法的最低检测量为10μg/kg 。
2原理
用三氯甲烷-0.1mol/L磷酸或石油醚-甲醇/水提取样品中的赭曲霉毒素A，样品提取液经液-液分配后，根据其在365nm紫外光灯下产生黄绿色荧光，在薄层色谱板上与标准比较测定含量。
3试剂
以下试剂除特殊规定外均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度的水。
⒊1石油醚（60～90℃或30～60℃）。
⒊2甲醇。
⒊3三氯甲烷。
⒊4甲苯。
⒊5乙酸乙酯。
⒊6甲酸。
⒊7冰乙酸。
⒊8乙醚。
⒊9苯-乙腈（98：2）。
⒊100.1mol/L磷酸[c(H3PO4）=0.1mol/L]：称取11.5g磷酸（85%）加水稀释至1000mL 。
⒊112mol/L盐酸溶液[c(HCL)=2mol/L]：量取20mL盐酸，加水稀释至120mL 。
⒊124%氯化钠溶液。
⒊130.1mol/L碳酸氢钠溶液[c(NaHCO3）=0.1mol/L]：称取8.4g碳酸氢钠，加适量水溶解，并用水稀释至1000mL 。
⒊14硅胶G：薄层层析用。
⒊15赭曲霉毒素A（以下简称OA）标准溶液：用苯-冰乙酸（99：1）配成40μg/mL赭曲霉毒素A贮备液，并用紫外分光光度计测定其浓度。浓度的测定参照GB5009.22《食品中黄曲霉毒素B1的测定方法》中2.14条（赭曲霉毒素A的最大吸收峰波长333nm，分子量403，克分子消光系数值为5550）。精密吸取贮备液，用苯稀释成每毫升含赭曲霉毒素A0.5μg，赭曲霉毒素A标准液应置冰箱中避光保存。
4仪器
所有玻璃仪器均需用稀盐酸浸泡，用自来水，蒸馏水冲洗。
⒋1小型粉碎机。
⒋2电动振荡器。
【赭曲霉毒素的作用机理?】⒋3玻璃板：5cm×20cm 。
⒋4薄层涂布器。
⒋5展开槽：内长25cm、宽6cm、高4cm 。
⒋6紫外光灯：365nm 。
⒋7微量注射器：10μL、50μL 。
⒋8具0.2mL尾管的10mL，小浓缩瓶。
5分析步骤
⒌1提取
⒌1.1甲法
称取20g粉碎并通过20目筛的样品，置于200mL具塞锥形瓶中，加入100mL三氯甲烷和10mL0.1mol/L磷酸，振荡30min后通过快速定性滤纸过滤；取20ml，滤液置于250mL分液漏斗中，加50mL0.1mol/L碳酸氢钠溶液振摇2min，静置分层后，将三氯甲烷层放入另一个100mL分液漏斗中（少量乳化层，或即使三氯甲烷层全部乳化都可放入分液漏斗中），加入50mL0.1mol/L碳酸氢钠溶液重复提取三氯甲烷层，静置分层后弃去三氯甲烷层（如三氯甲烷层仍乳化，弃去，不影响结果）。碳酸氢钠水层并入第一个分液漏斗中，加约5.5mL2mol/L盐酸溶液调节pH2～3（用pH试纸测试），加入25mL三氯甲烷振摇2min，静置分层后，放三氯甲烷层于另一盛有100mL水的250mL分液漏斗中，酸水层再用10mL三氯甲烷振摇、提取、静置，将三氯甲烷层并入同一分液漏斗中。振摇、静置分层，用脱脂棉擦干分液漏斗下端，放三氯甲烷层于一75ml蒸发皿中，将蒸发皿置蒸汽浴上通风挥干。用约8mL三氯甲烷分次将蒸发皿中的残渣溶解，转入具尾管的10mL浓缩瓶中，置80℃水浴锅上用蒸汽加热吹氮气（N2），浓缩至干，加入0.2mL苯-乙腈（98：2）溶解残渣，摇匀，供薄层色谱点样用。
⒌1.2乙法
称取20g粉碎并通过20目筛的样品加于200mL具塞锥形瓶中，加30mL石油醚和100mL甲醇-水（55：45），在瓶塞上抹上一层水盖严防漏。振荡30min后，通过快速定性滤纸滤入分液漏斗中，待下层甲醇水层分清后，取出20mL滤液置于100mL分液漏斗中，用pH试纸测试，一般为pH5～6 。加入25mL三氯甲烷振摇2min，静置分层后放出三氯甲烷层于另一分液漏斗中，再用10mL三氯甲烷重复振摇提取甲醇-水层（在用三氯甲烷振摇提取时，如发生乳化现象，可滴加甲醇促使其分层），将三氯甲烷层合并于同一分液漏斗中，加入50～100mL4%氯化钠溶液（加入量视品种不同而异，大豆加100mL，小麦、玉米则加50mL左右），振摇放置（如为大豆样品提取液还须轻轻反复倒转分液漏斗，使乳化层逐渐上升。如乳化严重可加入少许甲醇），待三氯甲烷层澄清后，用脱脂棉擦干分液漏斗下端，放三氯甲烷层于75mL蒸发皿中（如为大豆样品须再加入10mL三氯甲烷振摇，三氯甲烷层合并于同一蒸发皿中），将蒸发皿置蒸汽浴上通风挥干。

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