赭曲霉毒素的作用机理?( 三 )


以下操作自“用约8mL三氯甲烷分次将蒸发皿中的残渣溶解”起,按甲法操作 。
⒌2测定
⒌2.1薄层板的制备
称取4g硅胶G,加约10mL水于乳钵中研磨至糊状 。立即倒入涂布器内制成5cm×20cm,厚度0.3mm的薄层板三块,在空气中干燥后,在105~110℃活化1h,取出放干燥器中保存 。
⒌2.2点样取两块薄层板,在距薄层板下端2.5cm的基线上用微量注射器滴加两个点:在距板左边缘1.7cm处滴加OA标准溶液8μL(浓度0.5μg/mL),在距板左边缘2.5cm处滴加样液25μL,然后在第二块板的样液点上加滴OA标准溶液8μL(浓度0.5μg/mL) 。点样时,需边滴加边用电吹风吹干,交替使用冷热风 。
⒌2.3展开
⒌2.3.1展开剂
横展剂:乙醚或乙醚-甲醇-水(94:5:1) 。
纵展剂:
a.甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(6:3:1.2:0.06)或甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6:3:1.4);b.苯-冰乙酸(9:1) 。
⒌2.3.2展开
横向展开:在展开槽内倒入10mL横展剂,先将薄层板纵展至离原点2~3cm,取出通风挥发溶剂1~2min后,再将该薄层板靠标准点的长边置于同一展开槽内的溶剂中横展,如横展剂不够,可添加适量,展至板端过1min,取出通风挥发溶剂2~3min 。
纵向展开:在另一展开槽内倒入10mL纵展剂,将经横展后的薄层板纵展至前沿距原点13~15cm 。取出通风挥干至板面无酸味(约5~10min) 。
⒌2.4观察与评定
将薄层色谱板置365nm波长紫外光灯下观察 。
a.在紫外光灯下将两板相互比较,若第二块板的样液点在OA标准点的相应处出现最低检出量,而在第一板相同位置上未出现荧光点,则样品中的OA含量在本测定方法的最低检测量10μg/kg以下 。
b.如果第一板样液点在与第二板样液点相同位置上出现荧光点则看第二板样液的荧光点是否与滴加的标准荧光点重叠,再进行以下的定量与确证试验 。
⒌2.5稀释定量
比较样液中OA与标准OA点的荧光强度,估计稀释倍数 。
薄层板经双向展开后,当阳性样品中OA含量高时,OA的荧光点会被横向拉长,使点变扁,或分成两个黄绿色荧光点 。这是因为在横展过程中原点上OA的量超过了硅胶的吸附能力,原点上的杂质和残留溶剂在横展中将OA点横向拉长了,这时可根据OA黄绿色荧光的总强度与标准荧光强度比较,估计需减少的滴加微升数或所需稀释倍数 。经稀释后测定含量时,可在样液点的左边基线上滴加二个标准点,OA的量可为4ng、8ng,比较样液与两个标准OA荧光点的荧光强度,概略定量 。
⒌2.6确证试验
用碳酸氢钠乙醇溶液(在100mL水中溶解6.0g碳酸氢钠,加20mL乙醇)喷洒色谱板,在室温下干燥,于长波紫外光灯下观察,这时OA荧光点应由黄绿色变为蓝色,而且荧光强度有所增加,再估计样品中OA,如果与喷洒前情况不一致,要利用喷洒前所做的估计 。
6计算
样品中赭曲霉毒素A的含量可按下式计算 。
V11000
x=A×━━×D×━━━
V2m
式中x──样品中赭曲霉毒素A的含量,μg/kg;
A─-薄层板上测得样液点上OA的量,μg;
D──样液的总稀释倍数;
V1─-苯-乙腈混合液的体积,mL;
V2──出现最低荧光点时滴加样液的体积,mL;
m─-苯-乙腈溶解时相当样品的质量,g 。
7精密度
该方法经五个协作者验证,在OA加入量分别为10,50,100μg/kg水平、每个水平n=2时,方法的回收率用X表示、精密度用SD表示:
小麦分别为93±10.23;92±14.72;105±38.85 。玉米分别为88±9.68;88±9.68;103±41.2 。[上述数据为(X±SD)%]
污染食物的霉菌毒素,只知道黄曲霉毒素可不够,来了解下这4种 一看到发霉,很多朋友第一反应就会联想到臭名昭著的黄曲霉毒素 。
其实霉菌的世界远比我们想象的复杂……
霉菌种类多、分布又广,生活中到处都能碰到 。
并不是所有的霉菌都有害,人们也常利用霉菌制作 美食。
备受国人喜爱的腐乳就是豆腐经过霉菌发酵而制成;还有用米曲霉生产酱油;用根霉菌生产米酒……
可惜大部分霉菌没法为人类所用,它们极具破坏力,让食物腐败变质,更糟糕的是有些霉菌带有产毒基因,在适宜的环境下会产生毒素,对人们的 健康 有很大危害 。
现在已知的霉菌毒素有几百种之多,最出名的就是黄曲霉毒素 。
至于黄曲霉毒素,已经有太多文章讲它,就不再重复,让我们跳过它,来介绍另外4种,容易污染常见食物、对人体危害大的霉菌毒素:
产生它的霉菌 :扩展青霉、 荨麻青霉、土曲霉、棒曲霉等