计算公式如下：(2)光强的相对抑制率与毒物毒性的大小成正比 。

20、 。
通常用发光细菌光抑制50的受试化合物浓度来表征其毒性效应(EC50) 。
将计算的光相对抑制率与受试化合物的浓度进行回归分析 ， 根据所得回归方程可求出相应的EC 值=EC50=0.2mg/l七、注意事项1、实验前判断发光细菌是否符合测试要求 。
2、平行或批处理样品的处理与测试应注意操作时间的一致性 。
八、讨论与思考1. 测试结果误差的主要来源？加液时间差导致各组暴露时间不同 。
2. 测试过程中 ， 暴露时间、温度以及体系的pH 等对发光细菌的发光特性是否有影响 ， 及影响如何？暴露时间过长 ， 温度过高 ， pH过酸过碱均会抑制发光菌发光特性3. 与藻类生长抑制实验结果进行比较讨论 。
FH-53B在某浓度范围对藻类生长有 。

21、促进作用 ， 氯化汞只对发光菌有抑制作用 。
实验三 小鼠骨髓细胞微核试验一、实验目的主要通过检测哺乳动物骨髓细胞中嗜多染红细胞（PCE）的微核出现率 ， 间接反映骨髓细胞染色体畸变发生率的高低 ， 从而判断受试动物是否具有致突变作用 。
主要用于测试干扰细胞有丝分裂的物质 。
二、实验内容1.PCE 的涂片制作及观察；2. 计算PCE 的微核发生率；3. 受试化合物毒性的判定 。
三、实验原理微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法 。
微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒 ， 大小相当于细胞直径的1/20-1/5 ， 呈圆形或杏仁状 ， 其染色与细胞核一致在间期细胞中可以出现一个或多个 。
一般认为微核是细胞 。

22、内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质 。
所以微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点 。
微核可以出现在多种细胞中 ， 但在有核细胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区别 。
红细胞在成熟之前最后一次分离后数小时可将主核排出 ， 而仍保留微核于PCE 细胞中 ， 因此通常计数PCE 细胞中微核 。
四、实验仪器和试剂1. 仪器手术刀、手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、干净纱布 ， 带橡皮头吸管、台式离心机、刻度离心管、晾片架、电吹风机、玻璃染色缸、2ml 注射器及针头、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜细胞计数器 。
2. 试剂甲醇（分析纯）、甘油 。

23、（分析纯）、小牛血清、生理盐水、吉姆萨 (Giemsa) 储备液、pH6.8的磷酸盐缓冲液 。
Giemsa 储备液的制备取Giemsa 染料1g ， 甘油66ml ， 甲醇60ml 。
先将染料置于研钵内 ， 加入小量甘油混合研细 ， 置60C 水浴2h ， 取出待冷却后加入甲醇 ， 混合静置2 周后 ， 过滤于棕色瓶内 ， 存放阴凉处 。
该贮备液存放的时间越长 ， 染色效果越好 。
临用时用Ph6.4 的磷酸盐缓冲液配置为10%的使用液 。
pH6.8 的磷酸盐缓冲液a.甲液1/15mol/L 磷酸二氢钾（KH2PO4） 。
称取9.06g KH2PO4（分析纯） ， 用蒸馏水溶解后定容至1000ml 。
b.乙液1/15mol/L 磷酸氢二钠（Na2H 。

24、PO4） 。
称取9.45g Na2HPO4（分析纯）（含2、7和12 份结晶水时 ， 则分别称取11.89g、17.87 g 和23.88g） ， 用蒸馏水溶解后定容至1000ml 。
c.pH6.8 的磷酸盐缓冲液 。
分别取50.40mL 的甲液和49.60mL 的乙液 ， 将两者混合均匀 。
阳性对照物环磷酰胺或丝裂霉素C五、实验步骤1.实验动物及处理动物选择一般情况下 ， 选择大鼠或小鼠作为微核实验的实验动物 。
本实验选择小鼠 。
小鼠体重18-20g 。
每组小鼠数量为10 只 ， 雌雄各半 。
染毒途径根据实验目的和受试化合物的性质 ， 可选择经口、经皮、经呼吸道及注射等染毒方式 。
原则上微核实验尽可能采用与人类实际接触受试环境毒物相 。

25、同的染毒途径 。
染毒次数及取样时间不同的环境毒物诱发微核出现的高峰时间差异很大 。
一般采用4 次连续染毒比较方便、合理 。
最后一次染毒后 ， 经过24h ， 取小鼠骨髓样品 ， 制作骨髓涂片 。
剂量选择最高剂量组受试环境毒物的剂量一般采用该毒物的而最大耐受量 。
也可根据受试化合物的1/2 LD50 作为最高剂量 。
在此以下再设3-5 个剂量组 。
同时 ， 还应该设立阳性对照组和阴性对照组 。
阳性对照组腹腔注射一次或二次环磷酰胺（50-100mg）或丝裂霉素C（100mg/kg） 。

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标题：环境|环境毒理学实验( 四 )