阴性对照组使用等体积的溶剂 。
2. 骨髓液的制备和涂片最后一次染毒后 ， 经过24h ， 用颈椎脱臼或乙醚麻醉的方法处死动物 ， 迅速取下胸骨 ， 剔去肌肉 ， 剪去每节 。

26、骨骺端 ， 用小型弯止血钳挤出骨髓 ， 点在清洁载玻片一端事先滴好的一滴小牛血清上 ， 混合均匀后推片 。
阳性及阴性对照组按上述方法同时进行处理 。
3. 固定将推好晾干的骨髓涂片放入玻璃染色缸中 ， 用甲醇溶液固定15min ， 取出晾干 。
4. 染色将固定晾干后的骨髓涂片 ， 用新鲜配制的吉姆萨使用液染色10-15min ， 取出后迅速用磷酸盐缓冲液（pH6.8-6.98）冲洗载玻片上的染色残液 ， 晾干 。
5. 观察计数镜检先以低倍镜、高倍镜粗检 ， 选择细胞完整、分布均匀和染色良好的区域 ， 再以油镜检查计数 。
可用细胞形态是否完好 ， 作为判断制片优劣的标准 。
嗜多染红细胞（PCE）呈灰蓝色 ， 成熟的正染红细胞（NCE）呈粉红色 。
细胞中微核多 。

27、数呈圆形 ， 边缘光滑整齐 ， 嗜色性与核质一致 ， 呈紫红色或蓝紫色 。
一个细胞内可出现一个或多个微核 。
计数200 个PCE中含微核的PCE 数 。
六、实验结果分析与评价微核率以千分率表示 ， 实验组微核率与阴性对照组进行统计学比较 ， 评定受试化合物的致突变性 。
1. 阳性判断标准实验组中至少有一个剂量组微核阳性率显著高于对照组 ， 而且实验结果还具有重现性；具有剂量-反应关系 。
2. 阴性判断标准由于实验剂量不够 ， 染毒次数不合适 ， 计数的细胞数不足 ， 实验动物自发微核率高等原因 ， 均可以使实验结果出现阴性 。
当实验设计符合标准 ， 实验剂量足够大 ， 染毒次数足够时 ， 实验结果仍为阴性 ， 方可认为受试化合物微核实验为阴性 。
计数200个PC 。

【环境|环境毒理学实验】28、E ， 6个有微核阴性：1-5 ， 阳性：3%七、注意事项1.实验所用的仪器必须干净 ， 小牛血清无污染；2.骨髓涂片上 ， 细胞疏密程度要合适 ， 细胞之间互不重叠；3.正确区分微核和涂片上的异物；4.实验动物年龄不宜过大 。
八、讨论与思考1. 制作涂片过程中 ， 有哪些因素可能会影响到之后的微核观察？（1）骨髓取得过多 ， 导致细胞重叠 。
（2）小鼠的毛发或其他组织细胞沾染了载玻片 。
（3）血清滴太少 ， 导致推片时无法覆盖载玻片 。
（4）未固定细胞便进行染色 ， 导致细胞被冲去 。
（5）冲洗过度 ， 导致细胞被冲去 。
2. 根据实验结果对受试化学物的毒性进行讨论 。
该化学物遗传毒性显著 ， 使小鼠的骨髓细胞微核率较阴性对照组有明显提高 。
反思与总结这次实验进行过程中出现了一些问题问题：一是第二次测藻液荧光强度时 ， 个别藻液未摇匀 ， 导致测得的结果偏大：二是小鼠骨髓涂片染色后冲洗时冲洗过度 ， 导致大量细胞被冲去 。
通过这次实验 ， 我有很大收获 ， 了解了环境毒理学方面的一点基本知识 ， 同时也提高了自己的实验操作技巧 ， 学到了很多 。
感谢刘薇老师的指导和教诲 ， 感谢学姐的指点与帮助 ， 同时感谢队友高秋远同学和梁旭同学的协作与配合 ， 谢谢你们 。

稿源：(未知)

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标题：环境|环境毒理学实验( 五 )