如果是较长的PloyG/C ， 建议客户使用3.0试剂 。

19、盒进行测序 。
Q-7.含有回文结构的模板测序结果是怎样的？A-7.以下图为例：位点94至137是一个回文结构 ， 该结构导致后面的信号衰减 ， 出现错误的判读 。
解决方法：使用反向引物对模板进行测序 ， 测到该回文结构处 ， 即可完成模板全长的拼接 。
A-8.测序峰图为前双峰的结果是什么样的？A-8. (1) 产物中含有小片段PCR产物；(2) 引物有两个结合位点 ， 其中一个结果中断解决方法：换引物反向测序 。
Q-9.测序峰图为后双峰是什么样的？A-9.原因和解决方法同回文结构及插入后双峰 。
Q-10.无信号的结果：信号值（ATGC的平均值）皆小于100A-10.以下图为例：测序无信号的判定：在确认引物、质粒抽提浓度、反 。

20、应安排等条件无问题的情况下 ， 测序结果峰型杂乱且信号值小于100的结果；此时则判定结果为测序无信号 。
两次测序无信号 ， 我们会取消实验 。
Q-11.飘峰：这是由于用3.0特殊试剂盒时碱基产生替代而出现碱基位移A-11.以下图为例在用特殊试剂盒（3.0）时 ， 会发生碱基替代 ， 从而出现碱基位移的现象 ， 即飘峰 。
解决方法：用普通试剂盒（3.1）测序消除碱基位移 。
注：3.0试剂盒只对局部高GC有效 ， 对POlyA/T、重复结构（GT/GA等）无效 ， 建议先用3.0试剂盒测序 ， 然后用普通试剂盒进行纠正 。
Q-12.没有任何干扰的结果A-12.DNA 测序常见问题解答（FAQs）(From : HTUTUUUTTH )DN 。

21、A 测序常见问题解答（FAQs）Q1. DNA测序的原理是什么？步骤如何？ABI 3730XL型测序仪测序的准确度如何？Q2. 为什么在测序报告上找不到我的引物序列？ Q3. 我有一个大于2KB的PCR片段 ， 希望你们帮我测通 。
Q4. 为什么我的PCR片段为300bp ， 而你们发送给我的序列却达到了700多bp？ Q5. 我的引物做PCR效果很好 ， 为什么用于测序总得不到好的结果？ Q6. 我进行PCR反应时 ， 所用的退火温度是59 ， 是否可以用该温度对我的样品完成测序反应？ Q7. 我的PCR扩增产物有多条带 ， 是否可以为我完成切胶纯化 ， 再进行测序反应？哪些情况下需要进行切胶纯化？ Q8. 我的PCR 。

22、产物为单一条带 ， 但未经纯化 ， 是否可以直接送到贵公司进行测序？ Q9. 我的PCR产物电泳检测条带单一 ， 为什么测序结果说模板杂？ Q10. 什么是碱基缺失？ Q11. 什么是引物不纯？ Q12. 重复结构对测序有哪些影响？ Q13. 什么是模板不单一？ Q14. poly结构的测序结果是怎样的？ Q15. 含有回文结构的模板测序结果是怎样的？Q1. DNA测序的原理是什么？步骤如何？ABI 3730XL型测序仪测序的准确度如何？答：DNA测序的原理是末端终止法 。
具体步骤如下：定量：对样品及引物进行定量 。
测序反应：在反应体系中加入已定量的模板和引物 ， BigDye等试剂 ， PCR仪上完成测序反应 。
读取 。

23、数据：利用测序仪读取被测样品的碱基序列 。
ABI公司目前承诺测序结果在800bp以内准确率为98.5% 。
Q2. 为什么在测序报告上找不到我的引物序列？答：1） 如果您提供的是PCR样品 ， 在测序报告上找不到您的引物序列是正常的 。
这是因为测序反应是通过对被荧光标记的ddNTP的读取而获得基因序列的 ， 而测序引物由于没 有荧光标记 ， 因此自然在测序结果中就不会被识别 。
实际上不但测序引物无法识别 ， 而且由于目前测序技术的局限性 ， 紧靠测序引物一侧的3050个bp通常也无法100识别 ， 如果需要验证这个区域的碱基序列或者测序引物本身的序列 ， 就需要用另一侧引物进行反向测序 。
2 ）您提供的是质粒或菌液样品,使用通用引物 。

【DNA|DNA测序常见问题及其分析】24、测序 ， 找不到您的PCR引物可能是因为您的PCR引物距离载体的通用引物位点过近 ， 由于测序反应在距离起始位点30-50bp内的结果可信度不高 ， 因此会影响您正确读取您的PCR引物序列 。
Q3.我有一个大于2KB的PCR片段 ， 希望你们帮我测通 。
答：对于片段较大的PCR样品我们建议您将其克隆进载体后再做测序 。
因为 ， 一方面PCR产物的纯度不是很好掌握 ， 测序的成功率不如质粒和菌液测序；另一方面 ， 与PCR引物相比 ， 一般载体上的通用引物与模板结合的能力更强 。
长度为1Kb的DNA模板需要两个测序反应 ， 才有可能得到完整准确的读长 ， 对于1kb以上的DNA片断 ， 在两个反应后还需要设计合成测序引物 ， 测序后拼接出全长 ， 对于这 。

稿源：(未知)

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标题：DNA|DNA测序常见问题及其分析( 四 )