1、2013 V1.0（草稿）（草稿）2 目的：目的：提高我国提高我国ALK融合基因型肺癌的个体化精准治疗能力融合基因型肺癌的个体化精准治疗能力 （precision therapy）非小细胞肺癌的个体化靶向治疗：非小细胞肺癌的个体化靶向治疗：伴随分子诊断是前提伴随分子诊断是前提虽然虽然ALK融合基因阳性患者仅占融合基因阳性患者仅占NSCLC的的5% ， 但是 ， 但是总体患者负荷较总体患者负荷较大 ， 治疗需求迫切大 ， 治疗需求迫切ALK融合基因阳性融合基因阳性NSCLC具有独特临床具有独特临床&病理、治疗和预后特征 ， 病理、治疗和预后特征 ， 已已成为成为NSCLC中的一个分子亚型中的一个分子亚型第一个第一个AL 。

2、K抑制剂克唑替尼已获得抑制剂克唑替尼已获得SFDA的批准（的批准（2013.01）AuthorALK incidencePublicationsZhang X, Wu YL et al.11.6% (12/103)Mol Cancer 2009Wong, et al. (Hongkong)4.9% (13/265)Cancer 2009Li H, Chen HQ, et al.3.0% (7/230 smokers, AC)Lung Cancer 2012Sun Y, Chen H, Ji H, et al. 5.8% (3/52 surgical AC, non-smokers)JCO 20 。

3、10Wu SG, Yang PC, et al. (Taiwan)34% (39/116, AC, WT EGFR)JTO 2012Rikova K, et al4.7% (6/137)Cell 2007Wang Z, Wang J, et al.9.7% (11/113, Stage IV )Oncology 2012Ren S, Zhou C, et al.9.6% (10/104, Female, AC, non-smoker)Cell Biochem Biophys. 2012;
Cancer 2012GLCI internal data: 7% (70/977);
7.7% (31/ 。

4、400)4 总体原则总体原则综合肺癌获取的各类生物材料的特征、分子分析方法的特点、实验室综合肺癌获取的各类生物材料的特征、分子分析方法的特点、实验室自身条件 ， 需要多学科大协作 ， 合理采取有效检测方法和流程 ， 自身条件 ， 需要多学科大协作 ， 合理采取有效检测方法和流程 ， 以保以保证证ALK融合型肺癌的融合型肺癌的检出率和准确率检出率和准确率从临床诊断角度出发 ， 综合最新的研究数据 ， 并结合从临床诊断角度出发 ， 综合最新的研究数据 ， 并结合SFDA批准的伴随批准的伴随诊断方法 ， 诊断方法 ， 定期更新定期更新 ， 保证检测结果的 ， 保证检测结果的可信性可信性和临床实际和临床实际可操作性可操作性5 ALK+ can be enr 。

5、iched in clinical factors: age, histology, smoking status ALK+ can be enriched in molecular subtypes: EGFRwt, KRASwt, and AC30% in Caucasian pts(AC, EGFR wt and KRAS wt)42% in Chinese mailand pts (AC, EGFR wt and KRAS wt)34% in Taiwanese pts (AC EGFRwt ) ALK+ concomitant with EGFR mutations: GLCI da 。

6、ta: 1.3% (13/977) overally;
in EGFR mut pts, 3.9% (13/336) co-alteration rate;
in ALK+ pts, 18.6% (13/70) co-alteration rateEURTAC data (2012 ESMO by Rosell): in EGFRmut pts, 15.8% (15/95) co-alteration rateGLCI internal data;
Rosell, ESMO 2012;
Horn, JCO 2011 6NSCLC 活检组织标本活检组织标本EGFR突变检测突变检测腺癌（粘液性或实性 ，。

7、腺癌（粘液性或实性 ， signet cell？）？）阴性或阴性或unknown下一步7组织标本类型组织标本类型 手术、活检标本：手术、活检标本： FFPE标本：推荐FISH、RT-PCR、IHC 新鲜标本：推荐RT-PCR 细胞学标本：细胞学标本： 细胞沉渣（pellet）：RT-PCR 细胞蜡块（cell block）：推荐FISH、RT-PCR、IHC 8NSCLC 活检组织标本活检组织标本EGFR突变检测突变检测腺癌（粘液性或实性 ， 腺癌（粘液性或实性 ， signet cell？）？）阴性或阴性或unknown据组织类型选择合适技术新鲜标本石蜡标本Ventana IHC手动手动IHC检测检测* 。

8、 ？阳性阳性阴性阴性FISHRT-PCR多重多重PCR或或RACE*: 对于部分无条件行Ventana IHC检测的中心 ， 手动ALK IHC可作为替代的筛选方法: 如果是细胞学样本 ， 推荐使用RT-PCR检测 虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄60岁）中进行筛选3+/2+/1+ALK融合基因阳性非小细胞肺癌融合基因阳性非小细胞肺癌93-ALK探针杂交端粒的断点大约是300 KB ， 并用橘色荧光标示 。
5-ALK探针杂交着丝粒的断点大约是442 kb ， 并用绿色荧光标示 。
Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit. 06N38-020, 30 。

9、-608495/R210橘红色与绿色探针相互橘红色与绿色探针相互临近或粘合：临近或粘合：ALK 阴性阴性橘红色与绿色探针相互分离或橘红色与绿色探针相互分离或单个橘红色探针：单个橘红色探针：ALK阳性阳性11 结果判读需标准化 ， 必需经过培训的病理科医师进行判读结果判读需标准化 ， 必需经过培训的病理科医师进行判读 晚期患者小活检标本晚期患者小活检标本(2mm) ， 很难保证每个视野存在 ， 很难保证每个视野存在50个癌个癌细胞细胞 价格昂贵 ， 价格昂贵 ， 2600元左右元左右/例 ， 无法适用于筛选例 ， 无法适用于筛选 目前 ， 临床研究的结果均是以目前 ， 临床研究的结果均是以FISH为检测手段为检测手段12Split-s 。

10、ignal FISH:Fusion-signal FISH:Translocation-positiveTranslocation-negativeFalse-positiveFalse-negativeMicroscope:Sample/nucleus:Slide:13 ALK FISH interpretaion criteria: 15% split signals, at least 50 tumor cells were analyzed, if the result is equivocal, additional 50 tumor cells should be counted. 。

11、 Positive cells: separated green and orange signals or single red signals identified cells with rearranged ALK;
Negative cells: overlapping of orange and green signals (yellowish) indicated cells in which ALK was not rearranged.Martelli MP, Sozzi G, Hernandez L, et al. EML4-ALK rearrangement in non- 。

12、small cell lung cancer and non-tumor lung tissues. Am J Pathol. 2009 Feb;
174(2):661-70Shaw AT, Yeap BY, Mino-Kenudson M, et al. Clinical features and outcome of patients with non-small-cell lung cancer who harborEML4-ALK. J Clin Oncol 2009;
27:424753.The assay should be only on 10% neutral buffered F 。

13、FPE human lung tumor tissue. Other types of specimens or fixatives should not be used. 14Cancer, 2012Crizotinib 临床疗效与临床疗效与ALK+ 无关无关:-ALK+% 分离率并非疗效就更好分离率并非疗效就更好- ALK+%分离率低并非疗效不好分离率低并非疗效不好15Sun, Jong-Mu, et al.Journal of Thoracic Oncology. 7(12):e36-e3816NSCLC 活检组织标本活检组织标本EGFR突变检测突变检测腺癌（粘液性或实性 ， 腺癌（粘液性或 。

【中国|中国ALK阳性NSCLC诊断专家共识V14】14、实性 ， signet cell？）？）阴性或阴性或unknown据组织类型选择合适技术新鲜标本石蜡标本Ventana IHC手动手动IHC检测检测* ？阳性阳性阴性阴性FISHRT-PCR多重多重PCR或或RACE*: 对于部分无条件行Ventana IHC检测的中心 ， 手动ALK IHC可作为替代的筛选方法: 如果是细胞学样本 ， 推荐使用RT-PCR检测 虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄60岁）中进行筛选3+/2+/1+ALK融合基因阳性非小细胞肺癌融合基因阳性非小细胞肺癌17在 ALK融合阴性的患者 ， 免疫组化显示无ALK表达 。
FISH：进行Vysis LSI ALK 。

15、双色打散FISH探针检测到ALK融合（分裂的红色和绿色信号） 。
http:/dx.doi.org/10.1155/2013/757490 对 AmoyDx EML4-ALK融合基因检测 ， 实时RT-PCR显示delta Rn对PCR循环数的变化 。
在 ALK融合阳性的患者 ， 免疫组化显示ALK表达 。
18CharacteristicsEML4-ALKMutation, N (%)Wild type, N (%)PAge, years 60 609 (3.6)19 (7.9)240 (96.4)220 (92.1)0.040Sex Male Female9 (3.1)19 (9.8)286 (96.9) 。

16、174 (90.2)0.002Stage IA IB IIA IIB IIIA IIIB IV 12 (9.0)4 (2.9)2 (33.3)1 (2.3)9 (5.5)00122 (91.0)132 (97.1)4 (66.7)42 (97.7)156 (94.5)130.036bHistopathology AD SCC AD-SCCe Others25 (7.2)2 (2.0)1 ( 5.6)0324 (92.8)99 (98.0)17 (94.4)200.053dDifferentiation Poor Good Unidentified8 (6.3)17 (5.0)3 (12.5)1 。

17、19 (93.7)320 (95.0)21 (87.5)0.594Smoking status No Yes Unknown21 (8.2)4 (2.6)3 (4.0)236 (91.8)152 (97.4)72 (96.0)0.021fProbaility of disease-free survival1.00.80.60.40.20.06.018.012.024.0Time(months)Logrank,P=0.006 ALK positive ALK negativeJ. X. Zhou ， et al. Annals of Oncology 00: 17, 2012 doi:10.109 。

18、3/annonc/mds62619 EML4-ALK变异体的多种引物 ， 变异体的多种引物 ， GAPDH作为对照作为对照 GLCI内部数据：所有内部数据：所有12个个ALK融合阳性样品均通过多融合阳性样品均通过多路路RT-PCR测序技术得以证实 。
测序技术得以证实 。
20Takeuchi et al. Multiplex Reverse Transcription-PCR Screening for EML4-ALK Fusion Transcripts. Clin Cancer Res 2008;
14(20): 6618Zhang et al. Molecular cancer 2010融合序列捕获融 。

19、合序列捕获的确定性的确定性21XC Zhang ， YL Wu et al. 2012 ESMO ， 22NSCLC 活检组织标本活检组织标本EGFR突变检测突变检测腺癌（粘液性或实性 ， 腺癌（粘液性或实性 ， signet cell？）？）阴性或阴性或unknown据组织类型选择合适技术新鲜标本石蜡标本Ventana IHC手动手动IHC检测检测* ？阳性阳性阴性阴性FISHRT-PCR多重多重PCR或或RACE*: 对于部分无条件行Ventana IHC检测的中心 ， 手动ALK IHC可作为替代的筛选方法: 如果是细胞学样本 ， 推荐使用RT-PCR检测 虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸 。

20、烟、年龄5%的肿瘤细胞呈现颗的肿瘤细胞呈现颗粒状细胞质强着色；粒状细胞质强着色；IHC 2+：5%的肿瘤细胞呈现中度细胞的肿瘤细胞呈现中度细胞质着色；质着色；IHC 1+：5%的肿瘤细胞呈现微弱或模糊的细胞质的肿瘤细胞呈现微弱或模糊的细胞质着色或着色或5%的肿瘤细胞有任何程度的着色；的肿瘤细胞有任何程度的着色；IHC 0：肿瘤细胞：肿瘤细胞无着色 。
无着色 。
”E Thunissen, et al. Virchows Arch(2012)461:245-25731Yoshiko Murakami, et al. Frontiers in Oncology .2012;
doi: 10.3389/fo 。

21、nc.2012.00024 32Thunnissen E, et al. Virchows Arch . 2012;
461:245257 33NSCLC 活检组织标本活检组织标本EGFR突变检测突变检测腺癌（粘液性或实性 ， 腺癌（粘液性或实性 ， signet cell？）？）阴性或阴性或unknown据组织类型选择合适技术新鲜标本石蜡标本Ventana IHC手动手动IHC检测检测* ？阳性阳性阴性阴性FISHRT-PCR多重多重PCR或或RACE*: 对于部分无条件行Ventana IHC检测的中心 ， 手动ALK IHC可作为替代的筛选方法: 如果是细胞学样本 ， 推荐使用RT-PCR检测 虚线：建议 。

22、在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄60岁）中进行筛选3+/2+/1+ALK融合基因阳性非小细胞肺癌融合基因阳性非小细胞肺癌34ALK融合蛋白融合蛋白: 无ALK重排的NSCLC不表达ALK融合蛋白 部分ALK融合蛋白表达较低Ventana IHC的原理的原理: 使用具有高度敏感性和特异性的一抗D5F3 全自动仪操作 ， 充分保证特异性 独有Optiview扩增技术 ， 充分保证敏感性D5F3 rabbitt monoclonal antibodyOptiview DAB IHC DetectionOptiview Amplification Kit3535全自动全自动Ventana。

23、IHC：信号扩增：信号扩增常规常规IHC：无信号扩增：无信号扩增D5F3 rabbit mAbControl rabbit mAbALK-positive NSCLC by Vysis FISH and Ventana ALK IHC36D5F3 rabbit mAbControl rabbit mAbALK-positive NSCLC by Vysis FISH and Ventana ALK IHCD5F3 rabbit mAbControl rabbit mAbLarge majority of positive cases exhibit strong staining.3737 判 。

24、读标准简单 ， 仅存在阴性判读标准简单 ， 仅存在阴性 or 阳性的判读阳性的判读 IHC 阳性阳性 = FISH 阳性阳性EC Minca, et al. J Mol Diag, 201338VENTANA. 1011623EN Rev C.2012;
FT0700-410f 临床解释临床解释染色说明染色说明ALK阳性阳性肿瘤细胞细胞质中存在强颗粒状染色肿瘤细胞细胞质中存在强颗粒状染色（任何阳性肿瘤细胞的百分比） ， （任何阳性肿瘤细胞的百分比） ， 已已知的假阳性染色要排除 ， 包括：知的假阳性染色要排除 ， 包括：光镜下肺泡巨噬细胞胞质内斑点光镜下肺泡巨噬细胞胞质内斑点神经源性细胞（神经和神经节细胞）神经源性细 。

25、胞（神经和神经节细胞）腺上皮细胞染色腺上皮细胞染色腺上皮细胞胞内淋巴侵润腺上皮细胞胞内淋巴侵润NSCLC患者的正常粘膜组织和坏死肿患者的正常粘膜组织和坏死肿瘤组织有时也能见到染色颗粒（包括瘤组织有时也能见到染色颗粒（包括粘液素） ， 这些都应该排除在外粘液素） ， 这些都应该排除在外ALK阴性阴性肿瘤细胞细胞质中无强颗粒状染色肿瘤细胞细胞质中无强颗粒状染色IHC 阳性阳性=FISH阳性阳性IHC 阴性阴性=FISH阴性阴性3939 全自动检测 ， 避免操作流程中的误差 ， 可重复性好全自动检测 ， 避免操作流程中的误差 ， 可重复性好4040 价格便宜 ， 可同时用于价格便宜 ， 可同时用于ALK的筛选和诊断的筛选和诊断 E 。

26、MEA（欧盟）批准（欧盟）批准Ventana IHC用于诊断用于诊断ALK阳性阳性NSCLC ， 从而 ， 从而帮助确定可使用克唑替帮助确定可使用克唑替尼的患者尼的患者中国患者检测价格中国患者检测价格预估预估250元元/例例41NSCLC 活检组织标本活检组织标本EGFR突变检测突变检测阴性或阴性或unkown是否必须在富集是否必须在富集人群中检测人群中检测ALK？下一步42 EGFR与与ALK双突变的存在：双突变的存在：5%-8% EURTAC研究中：双突变概率研究中：双突变概率15.8%（RT-PCR法）法） 有文献报道 ， 双突变患者克唑替尼治疗有效有文献报道 ， 双突变患者克唑替尼治疗有效43 如果按 。

27、照临床因素富集 ， 将漏诊如果按照临床因素富集 ， 将漏诊33%（2/6）的的ALK阳性患者阳性患者Yoshiko Murakami, et al. Frontiers in Oncology .2012;
doi: 10.3389/fonc.2012.00024 44 如按病理因素富集：可能会遗漏如按病理因素富集：可能会遗漏30%(5/17)的的ALK阳性患者阳性患者45NSCLC 活检组织标本活检组织标本EGFR突变检测突变检测阴性或阴性或unknown据组织类型选择合适技术新鲜标本石蜡标本Ventana IHC手动手动IHC检测检测* 阳性阳性阴性阴性FISHRT-PCR多重多重PCR或或RACE 。

28、*: 对于部分无条件行Ventana IHC检测的中心 ， 手动ALK IHC可作为替代的筛选方法: 如果是细胞学样本 ， 推荐使用RT-PCR检测 虚线：建议优先在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄60岁）中进行筛选 。
3+/2+/1+ALK融合基因阳性非小细胞肺癌融合基因阳性非小细胞肺癌Q1：是否必须在富集人：是否必须在富集人群中检测群中检测ALK？Q2：手动：手动IHC的的判读标准判读标准？Q3：是否需推荐细胞：是否需推荐细胞学的诊断方法？学的诊断方法？46 宗旨：宗旨：“提高临床肿瘤标志物的应用实践能力提高临床肿瘤标志物的应用实践能力” 依照依照CSCO“团结、协作、务实团结、协 。

29、作、务实”的服务精神和的服务精神和“服务、协调、服务、协调、引导引导”的工作理念 ， 开拓进取、不断创新的工作理念 ， 开拓进取、不断创新47NSCLC 活检组织标本活检组织标本Ventana IHCALK IHC检测检测*IHC阳性阳性（3+/2+/1)IHC阴性阴性阳性阳性阴性阴性ALK融合基因阳性非小细胞肺癌融合基因阳性非小细胞肺癌FISHEGFR突变检测 ， 突变检测 ， 如阴性如阴性RT-PCR多重多重PCR或或RACE*: 对于部分无条件行Ventana IHC检测的中心 ， 手动ALK IHC可作为替代的筛选方法: 如果是细胞学样本 ， 推荐使用RT-PCR检测虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细 。

30、胞成分、不吸烟、年龄60岁）中进行筛选48NSCLC 活检组织标本活检组织标本Ventana IHCALK IHC检测检测*IHC阳性阳性（3+/2+/1)IHC阴性阴性阳性阳性阴性阴性ALK融合基因阳性非小细胞肺癌融合基因阳性非小细胞肺癌FISHEGFR突变检测 ， 突变检测 ， 如阴性如阴性Q1：是否必须：是否必须在富集人群中检在富集人群中检测测ALK？Q2：手动：手动IHC的的判读标准？判读标准？RT-PCR多重多重PCR或或RACE*: 对于部分无条件行Ventana IHC检测的中心 ， 手动ALK IHC可作为替代的筛选方法: 如果是细胞学样本 ， 推荐使用RT-PCR检测虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄60岁）中进行筛选Q3：是否需推：是否需推荐细胞学的诊断荐细胞学的诊断方法？方法？ 。

稿源：(未知)

【傻大方】网址：/a/2021/0905/0024106574.html

标题：中国|中国ALK阳性NSCLC诊断专家共识V14