1、用于侵袭、迁移等试验的细胞计数及铺板实验步骤1、准备工作用75% 的酒精擦拭双手 ， 同时用酒精棉球擦拭超净台 。
2）将培养液、实验所需材料也放入超净台进行灭菌（血清、培养基除外）3）倒置显微镜下 ， 观察细胞的状态 ， 是否已经长满培养瓶 ， 需要进行分瓶 。
2、弃去培养基 ， 用枪尽量去培养基 。
贴壁加入5mlPBS液清洗一遍 ， 四个方向晃动倒掉 。
3、将0.25%胰酶600ul加入培养皿内,拍皿 ， 上下左右铺匀 ， 37消化30分钟左右 ， 随时观察 ， 见到细胞泥沙状留下时 ， 即消化完全. 4、加入4ml的含5%血清的新鲜培养基 ， 反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散 ， 制成细胞悬液 ， 然后装到15ml离心管中 。
1000rpm,3min. 。

2、5、弃上清 。
用PBS 3ml 洗细胞 ， 吹打或涡旋混匀 ， 洗2次 ， 离心1000rpm,3min.弃上清 。
6、配细胞稀释液（BSA 终浓度为0.1%）.每种细胞需3ml稀释液,共6个样品 ， 所以配20ml稀释液(无血培20ml+10%BSA 200ul.)7、细胞沉淀中加3ml细胞稀释液 ， 吹打混匀 ， 即得稀释过的细胞悬液 。
8、细胞计数板每孔加15ul悬液 。
每个样品计数2次 ， 算均值 。
（8个大格总数/8=数值*104）9、根据铺板密度 ， 计算稀释过的细胞悬液用量 ， 剩余体积用细胞稀释液补 。
普通的细胞计数及铺板(免疫荧光 ， WB等不需定量)实验步骤1、准备工作用75% 的酒精擦拭双手 ， 同时用酒精棉球擦拭超净台 。
2） 。

3、将培养液、实验所需材料也放入超净台进行灭菌（血清、培养基除外）3）倒置显微镜下 ， 观察细胞的状态 ， 是否已经长满培养瓶 ， 需要进行分瓶 。
2、弃去培养基 ， 用枪尽量去培养基 。
贴壁加入5mlPBS液清洗一遍 ， 四个方向晃动倒掉 。
3、将0.25%胰酶600ul加入培养皿内,拍皿 ， 上下左右铺匀 ， 37消化30分钟左右 ， 随时观察 ， 见到细胞泥沙状留下时 ， 即消化完全. 4、加入4ml的含血清的新鲜培养基 ， 反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散 ， 制成细胞悬液 ， 然后装到15ml离心管中 。
1000rpm,3min.若细胞较多 ， 则需稀释 。
5、取上述1ml细胞悬液 ， 在加1ml含血清的新鲜培养基 ， 混匀 。
6、细胞计数板每孔加15ul悬液 。

4、 。
每个样品对角线计数2次 ， 算均值 。
7、根据铺板密度 ， 计算稀释过的细胞悬液用量 ， 剩余体积用含血清的新鲜培养基补 。
注意：1.不健康的细胞质中有空泡 ， 细胞内有颗粒样物质 ， 细胞间空隙增大 ， 变形 ， 不规则 ， 失去原有的特点 。
2.是否污染：传代或换液24-48 h注意观察细胞是否被污染 ， 污染的细胞培养液变浑浊 ， 镜下可见有大量菌丝 。
如果细胞生长缓慢 ， 生长特性改变 ， 胞质内颗粒性物质增多 ， 尽管培养液不变浑浊 ， 考虑可能有支原体污染 。
污染的细胞立即从培养箱中取走 ， 以免污染其它细胞。
3.皿用20天左右 ， 可更换 。
4.分清无血培、血培的用途 。
2012-09-03实作如下:一、常规收集细胞、消化、洗涤后 ， 加3ml细胞稀释液 ，。

【细胞|细胞计数及铺板】5、悬匀后计数 。
细胞株 计数Shluc 114*104 /ml 10*105个/114*104 =0.877 ml=877ulShE 138*104/ml 725ul 如此类推SHF 140*104/mlP 112*104/mlB 178*104/ml将细胞密度调整为5*105个/ml,每个样品总体积为2ml.则所需细胞数为2*5*105=10*105个 。
稀释过的细胞悬液体积补加细胞稀释液体积87711237251275714128689311075621438从以上调整过密度的细胞悬液中取适量进行transwell 及SRB实验 。
二、Transwell检测肿瘤细胞迁移实验1.在板孔（下室）中加入 。

6、600 ul/well含有10%血清培养基作为引诱剂 ， 小室底部接触培养基 。
2.轻轻的在细胞小室的上层加入140ul /well细胞悬液(若细胞密度为5 x 105cell/ml ， 则上室中共加入5 x 105cell/ml x140ul=7 x 104cell) 。
37 C孵育24小时（孵育时间根据实验调整 ， 12-36小时）3.孵育结束 ， 小心取出细胞小室 ， 用棉签轻轻擦去上室液体 。
移到预先加入800 ul /well 4%多聚甲醛或70%甲醇的下室中 ， 室温固定30分钟 。
4.小心取出细胞小室 ， 用吸干上室固定液 。
（可4保存 ， 隔日再做 。
）800 ul/ wellPBS加入下室洗3次 。
室温晾干 。
5. 800 ul/ well 0. 1%结晶紫染色30min 。
6.迅速将小室浸没到ddH2O浸泡数次 ， 去除多余的染料 。
吸去上室多余液体完全干燥小室 。
7.显微镜下观察结果 ， 随机选取3个不同的视野拍照 。
8.三、SRB1.取24孔板 ， 加入300ul 10%血培 ， 再加入200ul 调整密度为5*105个/ml细胞悬液 ， 即每well内有1*105个细胞 。
摇匀 ， 静置 ， 镜检37孵育过夜 ， 明日观察是否贴壁.贴壁后 ， 弃培养基 ， 即可测SRB 。
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稿源：(未知)

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标题：细胞|细胞计数及铺板