,遗传学第2章 基 。

31、本技术,84,最好是在长期晴朗的天气条件下取材 选择新萌发的幼芽或嫩梢 选择表面比较光滑的材料 对母株定期喷洒杀菌药剂 用纸袋或薄膜袋将枝条封套保护待其萌发新芽后取材 在室内采用水插促芽后取材 ，或是在温室植株上取材等 此外 ， 对一些带菌较多的材料（如茎尖） ， 置于水龙头下流水冲洗 ， 可大幅减少带菌量 。
,遗传学第2章 基本技术,85,2、消毒剂的杀伤力和材料对消毒剂的耐受力 不同的消毒剂种类 ， 对材料的杀伤力不相同 。
其渗透力和化学性质不同 不同的外植体材料 ， 对同一种消毒剂的耐受力也不相同 。
因其大小、结构、幼嫩程度的不同,遗传学第2章 基本技术,86,在选择消毒剂时 ， 考虑2个因素 对微生物杀灭作用强 。

32、烈 对植物材料比较安全的种类 。
在选择外植体材料时 则应优先考虑体积较大、带菌量较少、耐受力较强的类型 。
,遗传学第2章 基本技术,87,对于坚硬致密的外植体材料 如枣核、苦丁茶种子、柑桔种子 可采用渗透力强的消毒剂（如75酒精）直接进行表面灭菌或用0.1升汞处理数十分钟,遗传学第2章 基本技术,88,遗传学第2章 基本技术,89,遗传学第2章 基本技术,90,遗传学第2章 基本技术,91,遗传学第2章 基本技术,92,3、清洗的重要性 外植体经消毒剂处理后 ， 必须用无菌水洗去残存的消毒剂 否则会对外植体造成长期的伤害 尤其是附着力强的消毒剂如升汞等,遗传学第2章 基本技术,93,4、内生菌问题。

33、某些植物的外植体除表面带菌外 ， 其内部或浅表的组织也会带菌 ， 称为“内生菌” 如兰花 可在培养基中添加广谱抗生素 ， 并通过多次继代培养逐渐消除 。
,遗传学第2章 基本技术,94,5、切割与接种的技巧 外植体的大小会影响成活率 ， 故应将材料切分成适宜的大小后接种 。
如果用于消毒的外植体比较大 ， 则应尽量切取其内部的组织进行接种（不带菌）；,遗传学第2章 基本技术,95,接种的方向也比较重要 茎尖、茎段如直立,须先端向上接种 ， 也可以平放;
叶片材料可用插接,也可以平放于培养基表面 但平放时一般将叶背朝下(有争议) ， 以利于对培养基的吸收 。
,遗传学第2章 基本技术,96,三、褐变的防止,、褐变的原理 2、影响褐变 。

34、的因素 （）基因型 （）外植体的生理状态及发育年龄 （）培养基组份的影响 （）培养条件 （）每代的培养时间,遗传学第2章 基本技术,97,、褐变的原理 很多植物体内含有较多的酚类化合物 。
尤其是木本植物 在完整的植物细胞中 ， 酚类化合物与多酚氧化酶分隔存在 ， 酶促反应不能进行 。
而外植体切口附近的分隔被破坏 ， 在有氧气的情况下 ， 多酚氧化酶催化酚类物质氧化成褐色的醌类 醌类物质在酪氨酸酶等酶的作用下 ， 使外植体细胞中的蛋白质聚合 ， 生长停顿 ， 最终导致死亡 。
,遗传学第2章 基本技术,98,愈伤组织培养、细胞悬浮培养、原生质体培养中 ， 也存在褐化现象 。
组织老化、细胞病变也会激活酚氧化酶而引起褐变,遗传学第2章 。

35、 基本技术,99,2、影响褐变的因素 （）基因型 不同植物种类的褐变情况有很大差别 。
木本植物一般比草本植物容易发生褐变 ，木本植物中存在更多的酚类物质 。
,遗传学第2章 基本技术,100,同种植物的不同类型或基因型 ， 也有差异 例如 蕉类种质资源中 ， B组染色体组越多 ， 茎尖褐变就越严重 ， 繁殖成功率就越低 荔枝品种中 ， 绿沙幼胚培养褐变严重 ， 东刘1号则较轻 。
,遗传学第2章 基本技术,101,（）外植体的生理状态及发育年龄 a随着年龄和组织木质化程度的增加 ， 褐变会有所加强 。
荔枝（怀枝）的实生幼苗基本上不会褐变 ， 而成年结果树枝条的褐变则相当严重； b分化程度高的材料容易褐变 如叶片比茎尖容易褐变 c成熟 。

36、度高的材料比幼嫩材料容易褐变 。
d伤口创面大、外植体体积小的材料较易褐变 ，在取材和切割时应注意 。
,遗传学第2章 基本技术,102,（）培养基组份的影响 液体培养基能有效地克服外植体的褐变 外植体溢出的有毒物质可以很快扩散到液体培养基中 ， 从而减轻了对外植体的危害 。
在液体培养基中加滤纸桥 ， 效果更好,遗传学第2章 基本技术,103,培养基成分对褐变也有一定的影响 适当降低无机盐浓度有利于减轻褐变初代培养时. 无机盐浓度过高 ， 会引起酚类物质大量产生 ， 加剧褐变 ，高浓度的蔗糖、丝氨酸、铵态氮、硼素及细胞分裂素类的BA、KT等具有促进多酚合成或刺激多酚氧化酶活性的作用 ， 加剧褐变发生 生长素类如2 ， 4- 。

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标题：遗传学第2章|遗传学第2章 基本技术课件( 六 )