注：1、事先测定水的电导率2、用吸水纸吸干探头的水分实验三 植物体内游离脯氨酸含量的测定一、目的在逆境条件下（旱、热、冷、冻） ， 植物体内脯氨酸的含量显著增加 ， 植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性 ， 抗旱性强的品种积累的脯氨酸多 。
因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标 。
另外 ， 由于脯氨酸亲水性极 。

8、强 ， 能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程 ， 因而能降低冰点 ， 有防止细胞脱水的作用 。
在低温条件下 ， 植物组织中脯氨酸增加 ， 可提高植物的抗寒性 ， 因此 ， 亦可作为抗寒育种的生理指标 。
二、原理磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应 ， 当用磺基水杨酸提取植物样品时 ， 脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中 。
然后用酸性茚三酮加热处理后 ， 茚三酮与脯氨酸反应 ， 生成稳定的红色化合物 ， 再用甲苯处理 ， 则色素全部转移至甲苯中 ， 色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低 。
在520nm波长下测定吸光度 ， 即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量 。
三、材料、仪器及试剂1.试剂及配制：（1）2.5酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6molL 。

9、1磷酸中（原液稀释2.3倍） ， 搅拌加热（70）溶解 ， 贮于4冰箱中 ， 2-3日有效 。
（2）3磺基水杨酸配配制：3.496g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml 。
（3）10gml-1脯氨酸标准母液配制：精确称取20mg脯氨酸 ， 倒入小烧杯内 ， 用少量蒸馏水溶解 ， 再倒入200ml容量瓶中 ， 加蒸馏水定容至刻度（为100gml1脯氨酸母液） ， 再吸取该溶液10ml ，加蒸馏水稀释定容至100ml ， 即为10gml-1脯氨酸标准液 。
四、实验步骤1、脯氨酸标准曲线的制作1.1取6支试管 ， 编号 ， 按下表配制每管含量为012g的脯氨酸标准液 。
加入表中试剂后 ， 置于沸水浴中加热30min 。
取出冷却 。
以去离子水溶液为空白对照 。

10、 ， 在520mm波长处测定吸光度（A）值 。
试 剂管 号01234510gml-1脯氨酸标准液（ml）蒸馏水（ml）冰醋酸（ml）3%磺基水杨酸2.5酸性茚三酮（ml）022240.21.82240.41.62240.61.42240.81.22241.01.0224每管脯氨酸含量（g）02468101.3标准曲线的绘制以15号管脯氨酸含量为横坐标 ， 吸光度值为纵坐标 ， 绘制标准曲线 。
2.样品的测定2.1脯氨酸的提取称取0.20.3g叶片于20ml试管 + 10ml 3磺基水杨酸溶液沸水浴10min（提取过程中要经常摇动）冷却过滤于干净的试管中脯氨酸提取液 。
2.2测定吸取酶提取液2ml + 2ml H 。

11、2O + 2ml冰醋酸 + 4ml 2.5酸性茚三酮沸水浴30min溶液呈红色冷却取上层液于比色杯520mm处测定吸光度（A）值 。
五、计算结果从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量 ， 按下公式计算样品中脯氨酸含量：X提取液总量（ml）脯氨酸含量（gg1Fw） 样品鲜重（g） 测定时提取液用量（ml）公式中：X 从标准曲线中查得的脯氨酸含量（g）实验四 植物体内丙二醛含量的测定一、原理丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害 ， 其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的 。
它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系 。
测定植物体内丙二醛含量 ， 通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中 。

12、的丙二醛产生显色反应 ， 生成红棕色的三甲川（3、5、5三甲基恶唑2、4二酮） ， 三甲川最大的吸收波长在532nm 。
但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰 ， 其中最主要的是可溶性糖 ， 糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处 ， 在532nm处也有吸收 。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加 ， 因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰 。
此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除 。
低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在532、450nm处的吸光度值 ， 所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁 。

13、离子 ， 通常植物组织中铁离子的含量为100300gg1Dw ， 根据植物样品量和提取液的体积 ， 加入Fe3的终浓度为0.5nmol L1 。
在532nm、600nm和450nm波长处测定吸光度值 ， 即可计算出丙二醛含量 。
二、实验步骤（1）提取采用硫代巴比妥酸显色法（赵世杰等 ， 2002） 。
称取0.20.3 g样品 ， 加10%三氯乙酸2 mL和少量石英砂 ， 研磨至匀浆 ， 再加8ml 三氯乙酸进一步研磨 ， 匀浆后4000 rpm ， 离心10min 。

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标题：最新|最新植物生理指标测定方法( 二 )