此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式 ， 最大光吸收由 4 。

28、65 nm 变成 595 nm， 通过测定 595 nm 处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量 。
蛋白质和染料结合是一个很快的过程 ， 约 2 min 即可反应完全 ， 呈现最大光吸收 ， 并可稳定 1 h， 之后 ， 蛋白质染料复合物发生聚合并沉淀出来 。
此法灵敏度高（比 Lowry 法灵敏 4 倍） ， 易于操作 ， 干扰物质少 ， 是一种比较好的定量法 。
其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低 ， 且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异 。
二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）试剂 1. 标准蛋白质溶液（100 g/mL 牛血清白蛋白）：称取牛血清蛋白25 mg， 加水溶解并定容至 100 mL， 吸取上述溶液40 mL，。

29、用蒸馏水稀释至100 mL 即可 。
2. 考马斯亮蓝试剂：称取 100 mg 考马斯亮蓝 G-250， 溶于 50 mL 90 乙醇中 ， 加入 100 mL 85（ W/V）的磷酸 ， 再用蒸馏水定容到 1000 mL， 贮于棕色瓶中 。
常温下可保存一个月 。
三、实验步骤 1. 标准曲线的绘制 取 6 支试管 ， 按表 261 加入试剂 ， 摇匀 ， 向各管中加入 5 mL 考马斯亮蓝试剂 ， 摇匀 ， 并放置 5 min 左右 ， 以 0 号试管为空白对照 ， 在 595 nm 下比色测定吸光度 。
以蛋白质含量为横坐标 ， 以吸光度为纵坐标绘制标准曲线 。
试 剂管 号012345标准蛋白质（ mL ）00.200.400.600.8 。

30、01.00蒸馏水量（ mL ）1.000.800.600.400.200蛋白质含量（ g ）0204060801002. 样品测定 （ 1 ） 样品提取 称取鲜样 0.25 0.5 g， 用 5 mL 蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后 ，3000 r/min 离心 10 min， 上清液备用 。
（ 2 ）吸取样品提取液 0.3 mL （视蛋白质含量适当稀释） ， 放入试管中（每个样品重复 2 次） ， 加入 5 mL 考马斯亮蓝试剂 ， 摇匀 ， 放置 2 min 后在 595 nm 下比色 ， 测定吸光度 ， 并通过标准曲线查得蛋白质含量 。
四、结果计算 （ mg/g ） 式中： C 查标准曲线值 ，g。
V T 提取 。

31、液总体积 , mL。
W F 样品鲜重 , g。
V S 测定时加样量 , mL。
注意点：1 ， 考马斯亮蓝G-250所配溶液不稳定 ， 所以每次实验都必须新配 ， 且必须新做标准曲线；2 ， 考马斯亮蓝G-250配制完毕 ， 如果发现溶液中有絮状沉淀 ， 可以试用滤纸过滤后使用 ， 如果实验中发现使用过滤后的考马斯亮蓝G-250溶液在与样品接触后短时间内便又发生絮凝 ， 基本上推测该考马斯亮蓝G-250过期（比较容易出现） 。
实验七、过氧化氢酶的活性测定高锰酸钾滴定法【原理】过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶 ， 含有铁 ， 它能催化过氧化氢分解为水和分子氧 ， 在此过程中起传递电子的作用 ， 过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂 。
据此 ，。

32、可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小 。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液 ， 经酶促反应后 ， 用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2 5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4即可求出消耗的H2O2的量 。
【试剂】【1】3M H2SO4：吸取浓硫酸80ml用去离子水定容至500ml【2】0.2mol/L磷酸缓冲液pH7.0；【3】0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）16 g ， 用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml ， 用0.1mol/L草酸溶液标定；0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于 。

33、17.6mol/L ， 取30% H2O2溶液4.87ml ， 稀释至500ml ， 用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；【实验步骤】 1、酶液提取 取叶片0.20.3g加入2ml pH7.0的磷酸缓冲液少量研磨成匀浆 ， 在加缓冲液定容转移至10ml后转入离心管中 ， 4000rpm离心15min ， 上清液即为过氧化氢酶的粗提液 。
2.滴定反应管 号对照管样品管粗酶液(ml)0.20.23mol/L H2SO4 (ml)50PH 7.0磷酸缓冲液1.81.80.1mol/L H2O2 (ml)55条 件加入H2O2立即计时于35恒温水浴中保温3min3mol/L H2SO4 (ml)05用 。

34、0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定H2O2 ， 至出现粉红色（在30min内不消失）为终点所用KMnO4体积（ml）AB【结果计算】： 酶活性用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：酶活(mgH2O2/gFWmin)=式中 A对照KMnO4滴定毫升数；B酶反应后KMnO4滴定毫升数；VT酶液总量（ml）；V1反应所用酶液量（ml）;
W样品鲜重（g）； 1.71ml 0.1mol/L的KMnO4相当于1.7mg H2O2 。
过氧化氢酶的活性测定紫外吸收法一、原理H2O2在240nm波长下有强烈吸收 ， 过氧化氢酶能分解过氧化氢 ， 使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低 。
根据测量吸光率的 。

35、变化速度即可测出过氧化氢酶的活性 。

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标题：最新|最新植物生理指标测定方法( 五 )