4冰箱中保存备用 。
（3）130mmol/L 蛋氨酸（Met）磷酸钠缓冲液准确称取L-蛋氨酸（C5H11NO2S ， MW=149.21）0.9699g于小烧杯中 ， 用少量0.05 mol/L pH7.8的磷酸钠缓冲液溶解后 ， 移入50mL容量瓶中并用0.05 mol/L。

21、pH7.8的磷酸钠缓冲液定容至刻度 ， 充分混匀（现用现配） 。
【溶于水 ， 3.3g/100ml 25 ， 不溶于有机溶剂】4保存可用12d.（4）750mol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.03066g NBT用磷酸缓冲液定容至50ml ， 避光4保存 ， 先用现配.（5）100mol/L EDTANa2溶液：称取0.03721g EDTANa2用水定容至1000ml【称取7.442 g EDTANa2用水定容至200ml ， 吸取1ml用水定容1000ml】（6）20mol/L 核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml避光保存【称取1.8825g核黄素用少量NaOH溶解并用蒸馏水定容至25ml ，。

22、吸取1ml用水定容1000ml】 。
4保存810天 。
三、实验步骤1. 酶液提取取植物叶片0.2g0.3g于预冷的研钵中 ， 加2ml预冷的0.05 mol/L pH7.8磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆 ， 加缓冲液使终体积为10ml 。
于4000rpm下离心15min ， 上清液即为SOD粗提液 。
2. 显色反应取试管3支 ， 1支为测定管 ， 另2支为对照管 ， 按下列加入一依次加入各溶液：名称样品管对照管1对照管250mmol/L 磷酸缓冲液（ml）5.05.05.0130mmol/L Met溶液（ml）0.30.30.3750mol/L NBT溶液（ml）0.30.30.3100mol/L EDTANa2液（ml）1.0 。

23、1.01.0去离子水（ml）2.02.02.020mol/L 核黄素（ml）0.30.30.30.3（酶液）0.3（缓冲液）0.3（缓冲液）混匀后将1支对照管置暗处 ， 其它各管于4000Lx日光下反应20min ， 然后立即遮光 ， 以遮光管为对照调零 ， 于560nm下测定光密度 。
（要求各管受光情况一致 ， 温度高时间缩短 ， 低时延长） 。
3.SOD活性测定与计算至反应结束后 ， 以不照光的对照管做空白 ， 分别测定其它各管的吸光度 。
四、结果计算已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50为一个酶活性单位表示 ， 按下式计算SOD活性 。
SOD总活性(AckAE)V/(Ack0.5WVt)=(AckAE)/(Ack0.015W 。

24、)SOD比活力SOD总活性/蛋白质含量上式中：SOD总活性以每克鲜重酶单位表示； SOD比活力：单位以酶单位mg蛋白表示Ack：照光对照管的吸光度 AE：样品管的吸光度V：样品液总体积（ml） Vt测定时样品用量（ml）实验六、过氧化物酶活性测定一、试验目的：过氧化物酶是植物体内普遍存在的活性较高的一种酶 ， 他与呼吸作用、光合作用以及生长素的氧化等都有密切关系 。
在植物生长发育过程中他的活性不断发生变化 ， 因此测量这种酶 ， 可以反映某一时期植物体内代谢的变化 。
通过本实验了解过氧化物酶的作用 ， 掌握常用的测定过氧化物酶的方法愈创木酚法 。
二、实验原理：在过氧化物酶催化下 ， 双氧水将愈创木酚氧化成茶褐色产物 ， 此 。

25、产物在470 nm处有最大吸收峰 ， 故可以通过测其吸光度的变化测定过氧化物酶的活性 。
三、实验试剂 1、0.05 mol/L PH 7.0的磷酸缓冲液： 0.2M A液（Na2HPO4）61ml和0.2M B液（NaH2PO4）39ml混合100ml ， 用去离子水定容400ml2、0.05 mol/L愈创木酚溶液：取0.6207g定容100ml1%愈创木酚溶液：吸取1毫升愈创木酚 ， 加入少量95%酒精溶解 ， 用水定容100ml ， 放于棕色试剂瓶中保存备用 3、2%双氧水溶液:：取30% H2O2 10ml用去离子水定容150ml4.、反应混合液取50mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0）30mL ， 2%过氧化 。

26、氢10mL ， 1%愈创木酚10mL混合 。
四、操作步骤1酶液提取：清洗干净叶片擦干 ， 称取0.20.3 g叶片 ， 剪成小片 ， 放入研钵加入适量10%PVPP（除去酚类物质）、石英沙、及2ml 50mmol的PH 7.0(5.5-7.5)的磷酸缓冲液PBS（0.02-0.1mmol）进行研磨 ， 磨碎后在加入8mlPBS溶液洗涤研钵一并装入离心管内 ， 4下4000rmin-1离心15min ， 收集上清液4保存备用 。
2显色反应类别对照管样品管反应液3.0 mL温度25缓冲液0.5 mL酶液0.5 mL测定波长470nm五、计算 过氧化物酶活性（OD470/(min.g)） =（A470VT）/（WVS0.01t）式 。

27、中：A470为反应时间内吸光度的变化 ， W为叶片鲜重g ， t为反应时间min ， Vt为提取酶液总体积ml ， Vs为测定时取用的酶液体积ml 。
实验19植物组织中可溶性蛋白质含量的测定 考马斯亮蓝 G 250 染色法一、原理 考马斯亮蓝 G 250 （ Coomassie brilliant blue，G-250 ）法是利用蛋白质 染料结合的原理 ， 定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法 。
考马斯亮蓝 G-250 存在着两种不同的颜色形式 ， 红色和蓝色 。
它和蛋白质通过范德瓦尔键结合 ， 在一定蛋白质浓度范围内 ， 蛋白质和染料结合符合比尔定律 。

稿源：(未知)

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标题：最新|最新植物生理指标测定方法( 四 )