二、实验步骤1、酶液提取 取叶片0.20.3g加入2ml pH7.0的磷酸缓冲液少量研磨成匀浆 ， 在加缓冲液定容转移至10ml后转入离心管中 ， 4000rpm离心15min ， 上清液即为过氧化氢酶的粗提液 。
4下保存备用 。
2.测定：取10ml试管3支 ， 其中1号为样品测定管 ， 1号为空白管 ， 按表40-2顺序加入试剂 。
表40-2 紫外吸收法测定H2O2样品液配置表管 号样品管对照管粗酶液(ml)0.2（煮死酶液）0.2pH7.0磷酸(ml)1.51.5蒸馏水(ml)1.01.025预热后 ， 逐管加入0.5ml 0.1mol/L的H2O2 ， 每加完一管立即记时 ， 并迅速倒入石英比色 。

36、杯中 ， 240nm下测定吸光度 ， 每隔1min读数1次 ， 共测4min ， 待3支管全部测定完后 ， 按下式计算酶活性 。
3.结果计算： 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u） 。
过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=式中 A240 = AS0 AS0加入煮死酶液的对照管吸光值；AS1 ，AS2样品管吸光值； Vt粗酶提取液总体积（ml）；V1测定用粗酶液体积（ml）； FW样品鲜重（g）；0.1A240每下降0.1为1个酶活单位（u）； t加过氧化氢到最后一次读数时间（min） 。
高锰酸钾滴定液的配制和标定1高锰酸钾滴定液（0.1molL）的配制市售高锰酸钾常含有少量MnO2等杂质 ， 蒸馏水也常 。

37、有微量的灰尘 ， 溶液在配制初期不够稳定 ， 浓度常降低 ， 因此高锰酸钾溶液不能用直接法配制 ， 所以先配制成近似所需的浓度 。
【1】方法：称取稍多于理论用量的固体高锰酸钾 ， 用新煮沸并冷却的蒸馏水溶解 ， 放置两天以上或加热至沸 ， 并保持微沸15min ， 使各种还原性物质完全氧化 ， 用垂熔玻璃器过滤 ， 除去MnO2等沉淀 ， 摇匀 ， 储存于棕色瓶中 ， 暗处密闭保存 。
【2】操作步骤：称取高锰酸钾16g ， 加蒸馏水1000ml ， 煮沸15min、放冷 ， 转人棕色瓶中密闭避光保存 ， 2天后过滤待标定 。
2高锰酸钾滴定液（0.1molL）的标定基准物： Na2C2O4在硫酸（0.5lmolL）溶液中 ， 加热至7585C时反应如下：2MnO4-5C2 。

38、O4-16H+2Mn2+10CO28H2O但溶液温度低于60 ， 反应速度较慢 ， 如温度高于90时 ， 则草酸钠会分解 ， 使测定结果偏高 。
操作步骤：称取恒重的基准物Na2C2O4约0.2g ， 加新煮沸过的冷蒸馏水20ml、3mol/L的 H2SO4 10ml使溶解 ， 加热至75 ， 自滴定管中逐滴加人待标定的高锰酸钾溶液 ， 滴定至溶液显微红并保持30秒不褪色为终点 。
当滴定完成时 ， 溶液温度应不低于55 。
C高V高=2/5 *（m草/M草）过氧化氢配制和标定一、实验原理酸性介质、室温下：5H2O2+2KmnO4+4H2SO45O2+2KHSO4+MnSO4+8H2OKMnO4为自身指示剂 ， 终点颜色：微红色（半分钟内不裉 。

39、色）二、实验步骤1H2O2溶液的配制移取H2O2溶液4.9 mL置于500mL容量瓶中 ， 加水稀释 ， 定容 ， 摇匀 。
2H2O2含量的测定移取配制得到的H2O2溶液20.00mL于锥形瓶中 ， 加入3mol.L-1H2SO4 5mL ， 用KMnO4标准溶液滴定到溶液呈微红色 ， 半分钟不褪色即为终点 。
平行三次 。
计算公式：C过V过=5/2 *C高V高备注一、磷酸缓冲液储备液A：0.2M Na2HPO4溶液（53.65g Na2HPO4*7H2O或71.7g Na2HPO4*12H2O配成1000ml）储备液B：0.2M NaH2PO4溶液（27.8g NaH2PO4*H2O配成1000ml）ml A +mlB ， 稀 。

40、释至200ml.即为0.1M磷酸缓冲液pH值0.2mol/LNa2HPO4溶液（mL）0.2mol/LNaH2PO4溶液（mL）5.76.593.55.88.092.05.910.090.06.012.387.76.115.085.06.218.581.56.322.577.56.426.573.56.531.568.56.637.562.56.743.556.56.849.051.06.955.045.07.061.039.07.167.033.07.272.028.07.377.023.07.481.019.07.584.016.07.687.013.07.789.510.57.891.58.57.993.57.58.094.75.314 。

稿源：(未知)

【傻大方】网址：/a/2021/0801/0023374095.html

标题：最新|最新植物生理指标测定方法( 六 )