（2）显色取上清液5 mL ， 加0.6% TBA 5 mL ， 混合后在100水浴上煮沸30 min ， 迅速在冰浴上冷却后再离心一次 。
分别测定上清液在450nm、532 nm和600。

14、nm处的吸光度值 ， 方法一： MDA质量摩尔浓度(nmol/g)=( A532-A600)VZV1/(0.155WV2)式中：VZ: 反应液总量(4 mL)； V1: 提取液体积(10 mL)； V2: 测定用用提取液量(2 mL)； W: 取样叶鲜重(g)0.155:为MDA的消光系数（nmol/l）方法二：方程组：A450=（85.4103）C糖（A532A600）=（155103）CMDA+（7.4103）C糖解得：A450 C糖= = 11.71A450（mmolL1）85.4103CMDA= 6.45（A532A600）0.56A450（molL1）公式中：A450在450nm波长下测 。

15、得的吸光度值A532在532nm波长下测得的吸光度值A600在600nm波长下测得的吸光度值 1.55105为摩尔比吸收系数C糖、CMDA分别是反应混合液中可溶性糖、MDA的浓度 。
1.按下式计算提取液中MDA浓度反应液体积（ml）CMDA 1000提取液中MDA浓度（molml1）= 测定时提取液用量（ml）2.按下式计算样品中MDA含量提取液中MDA浓度（molml1）提取液总量（ml）MDA含量（molg1 Fw）= 植物组织鲜重（g）试剂： 1、10三氯乙酸：称取三氯乙酸55.5556g加水溶解定容至500ml2、0.6硫代巴比妥酸（用10三氯乙酸配制）：称0.6707g TBA用少量1 。

16、mol/L氢氧化钠溶解后加10TCA溶解定容至100ml（4贮存） 实验五、SOD活力测定(NBT还原法)植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化 ， 如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等 。
这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化 。
近来大量研究表明 ， 植物在逆境胁迫或衰老过程中 ， 细胞内自由基代谢平衡被破坏而有利于自由基的产生 。
过剩自由基的毒害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用 ， 造成细胞膜系统的损伤 ， 严重时会导致植物细胞死亡 。
自由基是具有未配对价电子的原子或原子团 。
生物体内产生的自由基主要有超氧自由基（O2）、羟自由基（OH.）、过氧自由基（ROD）、烷氧自由基（RO）等 。
。

17、植物细胞膜有酶促和非酶促两类过氧化物防御系统 ， 超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）和抗坏血酸过氧化物酶（ASA-POD）等是酶促防御系统的重要保护酶 。
抗坏血酸（VC）、VE和还原型谷胱甘肽（GSH）等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂 。
SOD、CAT等活性氧清除剂的含量水平和O2、H2O2、OH. 和O2等活性氧的含量水平可作为植物衰老的生理生化指标 。
超氧自由基（O2.）是生物细胞某些生理生化反应常见的中间产物 。
自由基是本身带有不成对价电子的分子、原子、原子团或离子 ， 化学性质非常活泼 ， 是活性氧的一种 。
如果细胞中缺乏清除自由基的酶时 ， 机体就会受到各种损伤 。
超氧化物歧 。

18、化酶（Superoxide Dismutase） ， 简称SOD ， 能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧自由基（O2.） ， 生成H2O2和O2 。
H2O2由过氧化氢酶（CAT）催化生成H2O和O2 ， 从而减少自由基对有机体的毒害 。
一、原理超氧物歧化酶（superoxidedismutase ， SOD）普遍存在于动、植物体内 ， 是一种清除超氧阴离子自由基的酶 。
本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小 。
在有氧化物质存在下 ， 核黄素可被光还原 ， 被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2- ， 可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙 ， 后者在560nm处有最大吸收 。
而SOD可清除O2- ， 从而抑制了 。

【最新|最新植物生理指标测定方法】19、甲腙的形成 。
于是光还原反应后 ， 反应液蓝色愈深 ， 说明酶活性愈低 ， 反之酶活性愈高 。
据此可以计算出酶活性大小 。
二、试剂（一）试剂（1）0.2 mol/L pH7.8磷酸钠（Na2HPO4-NaH2PO4）缓冲液：A液（0.2 mol/L NaH2PO4溶液）：准确称取NaH2PO42H2O （MW=156.01）15.715g于50mL小烧杯中 ， 用少量蒸馏水溶解后， 移入500mL容量瓶中用蒸馏水定容至刻度 ， 充分混匀 。
4冰箱中保存备用 。
B液（0.2 mol/L Na2HPO4溶液）：准确称取Na2HPO412H2O（MW=358.14）71.63g于100mL小烧杯中 ， 用少量蒸馏水溶解后 ， 移入100 。

20、0mL容量瓶中用蒸馏水定容至刻度 ， 充分混匀 。
4冰箱中保存备用 。
取上述A液34mL与B液366mL充分混匀后即为0.2mol/L pH7.8的磷酸钠缓冲液 。
4冰箱中保存备用 。
（2）0.05 mol/L pH7.8磷酸钠缓冲液取0.2 mol/L pH7.8的磷酸钠缓冲液250mL ， 移入1000 mL容量瓶中用蒸馏水定容至刻度 ， 充分混匀 。

稿源：(未知)

【傻大方】网址：/a/2021/0801/0023374095.html

标题：最新|最新植物生理指标测定方法( 三 )