傻大方摘要：【实验|实验6+DNA酶切、连接及电泳检测( 二 )|DNA|酶切|连接|电泳|检测】Arber W. Smith H.O. Nathans D. 第一个第一个DNA重组分子重组分子 1972年年Paul Berg等人利用限制性内切酶等人利用限制性内切酶EcoRI和和 连接酶获得了第一个连接酶...
按关键词阅读： 实验 检测 连接 DNA 电泳 酶切
Arber W. Smith H.O. Nathans D. 第一个第一个DNA重组分子重组分子 1972年年Paul Berg等人利用限制性内切酶等人利用限制性内切酶EcoRI和和 连接酶获得了第一个连接酶获得了第一个DNA重组分子 。
标志着遗传工重组分子 。
标志着遗传工 程的开始 。
程的开始 。
The Nobel Prize in Chemistry 1980 Paul Berg 通过通过DNADNA重组技术构建重组技术构建DNADNA重组子重组子 酶切酶切 连 。
9、接连接 实实 验验 原原 理理 酶切酶切 限制性内切酶（限制性内切酶（restriction endonuclease）:一种在特一种在特 殊核甘酸序列处殊核甘酸序列处水解双链水解双链DNA的内切酶 。
的内切酶 。
限制性内切酶能限制性内切酶能特异性地结合特异性地结合于一段被称为限制性酶识于一段被称为限制性酶识 别序列的别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上 ， 并切序列之内或其附近的特异性位点上 ， 并切 割双链割双链DNA 。
l 生物体内能识别并切割特异的双链生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种序列的一种内切核内切核 酸酶酸酶 。
它是可以将 。
它是可以将外来的外来的DNA切断切断的酶 ， 即能 。
【实验|实验6+DNA酶切、连接及电泳检测】10、够限制异源的酶 ， 即能够限制异源 DNA的侵入并使之失去活力 ， 但对的侵入并使之失去活力 ， 但对自己的自己的DNA却无损害却无损害 作用 ， 这样可以保护细胞原有的遗传信息 。
由于这种切割作用 ， 这样可以保护细胞原有的遗传信息 。
由于这种切割 作用是在作用是在DNA分子内部进行的 ， 故名分子内部进行的 ， 故名限制性内切酶限制性内切酶 。
根据限制酶的识根据限制酶的识别切割特性别切割特性、催化催化 条件条件及及是否有修饰酶活性是否有修饰酶活性 ， 可分为可分为 型、型、 型和型和型三类 。
型三类 。
DNA重重 组技术中组技术中最常用的是最常用的是型酶型酶 ， 切割 ， 切割 后得到的是后得到的是带粘性末端带粘性末端或平或平末端的末端 。
11、的 线性线性DNA 。
型限制性内切酶既能催化宿主型限制性内切酶既能催化宿主DNA 的甲基化 ， 又催化非甲基化的的甲基化 ， 又催化非甲基化的DNA 的水解；而的水解；而型限制性内切酶型限制性内切酶只催只催 化非甲基化的化非甲基化的DNA的水解 。
的水解 。
型型 切割位点则在下游切割位点则在下游 24-26bp 处处。
类类需需MgMg2+ 2+、 、 SAMSAM及及 ATPATP 识别位点复杂 ， 识别位点复杂 ，特异性差 ， 特异性差 ，切割位点距切割位点距 识别点远 。
识别点远 。
类类仅需仅需MgMg2+ 2+ 识别切割特异性识别切割特异性 强 ， 切割发强 ， 切割发 生在识别位生在识别位 点 。
点 。
类类需需 。
12、MgMg2+ 2+及 及 ATPATP 切割位点在识别切割位点在识别 位点周围 ， 位点周围 ，酶活性不单酶活性不单 一 。
一 。
命名命名 l 一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两 个字母组成 ， 第四个字母表示菌株个字母组成 ， 第四个字母表示菌株(品系品系) 。
例如 。
例如， 从 ， 从Bacillus amylolique faciens H中提取的限中提取的限 制性内切酶称为制性内切酶称为Bam H ， 在同一品系细菌中得到 ， 在同一品系细菌中得到 的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶 ， 可的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶 ， 可 以编成不同的号 ， 如以编成不同的号 。
13、 ， 如HindII、HindIII ， HpaI、 HpaII ， MboI、MboII等 。
等 。
II型限制性内切酶主要特点：型限制性内切酶主要特点： 识别的专一核苷酸顺序最常见的是识别的专一核苷酸顺序最常见的是4个个 或或6个核苷酸 ， 少数也有识别个核苷酸 ， 少数也有识别5个核苷酸个核苷酸 以及以及7个、个、8个、个、9个、个、10个和个和11个核苷个核苷 酸的 。
在分子克隆实验中使用最普遍的酸的 。
在分子克隆实验中使用最普遍的 是那些识别是那些识别4个或个或6个碱基对的限制性内个碱基对的限制性内 切酶 。
切酶 。
II 型限制性内切酶的识别顺序是型限制性内切酶的识别顺序是 一个回文对称顺序 ， 即有一个中心对称一个回 。
14、文对称顺序 ， 即有一个中心对称 轴 ， 从这个轴朝两个方向轴 ， 从这个轴朝两个方向“读读”都完全都完全 相同 。
相同 。
这种酶的切割可以有两种方式：这种酶的切割可以有两种方式： 粘性末端和平头末端 。
稿源：(未知)
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标题：实验|实验6+DNA酶切、连接及电泳检测( 二 )